大熊猫轮状病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作     者：陈珍容 廖红 郝中香 马磊 龚永平 王成东 陈欣 韩国全 兰景超 颜其贵 

作者机构：四川农业大学动物医学院成都611130 成都大熊猫繁育研究基地成都610081 四川农业大学食品学院雅安625014 

出 版 物：《兽类学报》 (Acta Theriologica Sinica)

年 卷 期：2016年第36卷第4期

页      面：445-451页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 090603[农学-临床兽医学] 0905[农学-畜牧学] 0906[农学-兽医学] 09[农学] 

基　　金：国家科技支撑计划项目(2012BAC01B06) 973计划前期研究专项(2012CB722207) 成都大熊猫繁育基金研究会项目CFP研2012-9与CFP研2012-12 

主　　题：大熊猫轮状病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量RT-PCR 

摘      要：为了能对大熊猫轮状病毒的早期感染和隐性感染做出有效诊断,并为病毒定量分析提供技术支持。本研究根据Gen Bank中登录的大熊猫轮状病毒(GPRV)VP4基因序列设计1对引物,建立一种快速准确的检测大熊猫轮状病毒的荧光定量RT-PCR方法,并对引物浓度、退火温度和循环数进行优化,同时建立标准曲线,并将建立的荧光定量方法与常规RT-PCR方法比较。结果显示,本试验建立的荧光定量RT-PCR方法灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,比常规RT-PCR灵敏度高出至少100倍。特异性和重复性检测结果表明,该方法具有良好的特异性和较高的重复性。研究结果表明该方法可以对大熊猫轮状病毒进行稳定、可靠的检测,可以满足大熊猫轮状病毒特性研究和感染诊断的需要。