结核分枝杆菌esat6基因原核表达载体的构建和表达

作     者：陈全 骆旭东 蒋英 江山 朱道银 

作者机构：重庆医科大学基础医学院微生物学教研室重庆400016 

出 版 物：《重庆医科大学学报》 (Journal of Chongqing Medical University)

年 卷 期：2003年第28卷第1期

页      面：4-7页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：重庆市卫生局科学基金(00-1006) 

主　　题：结核分枝杆菌 基因原核表达载体 克隆 重组ESAT6蛋白 

摘      要：目的:构建结核分枝杆菌(MTb)esat6基因原核表达载体并进行表达。方法:PCR扩增MTb esat6基因,克隆人pQE30质粒,测序正确后,再亚克隆人pET32a(+)质粒,构建pQE30-ESAT6和pET32a(+)-ESAT6重组体。结果:重组体分别转化DH5a和BL21(DE3)菌后,经IPTG诱导,pQE30-ESAT6未表达目的蛋白,而pET32a(+)-ESAT6表达出19kDa左右重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4h重组蛋白表达量最高,表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中,表达量占全菌蛋白质的42％,用Western blotting证实其有良好的抗原性。经过Ni-NTA柱纯化,获得了纯度为92％的重组蛋白。结论:成功构建原核表达载体pET32a(+)-ESAT6,并获得重组ESAT6蛋白,为MTb重组抗原的应用奠定基础。