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结核分枝杆菌Ag85B与IL-12基因真核共表达质粒的构建及表达

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 664-666页

作者：江山朱道银骆旭东陈全蒋英重庆医科大学微生物学教研室重庆400016

目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL 12基因的共表达载体pBud85B IL12。方法 :将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL 12基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4 .1中 ,构建真核共表达质粒pBud85B IL12。以pBud85B IL12转染COS 7细胞 ,通... 详细信息

目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL 12基因的共表达载体pBud85B IL12。方法 :将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL 12基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4 .1中 ,构建真核共表达质粒pBud85B IL12。以pBud85B IL12转染COS 7细胞 ,通过RT PCR及ELISA方法检测目的基因的表达。结果 :在COS 7细胞中同时可检测到Ag85B和IL12的表达。结论 :pBud85B IL12共表达质粒的成功构建 ,为对其免疫原性。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B IL-12 共表达载体

结核分枝杆菌lhp基因原核表达载体的构建和表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 332-334,340页

作者：陈全骆旭东蒋英江山朱道银重庆医科大学微生物学教研室重庆400016

目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。结果 :以重组体分别转化DH5α和BL... 详细信息

目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。结果 :以重组体分别转化DH5α和BL2 1(DE3)菌后 ,经IPTG诱导 ,pQE30 CFP10未表达目的蛋白 ;而 pET32a(+) CFP10则表达出Mr 为 2 0 0 0 0左右重组蛋白。SDS PAGE分析显示 ,IPTG诱导 4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞质中 ,表达量占全菌蛋白质的 38% ,用Westernblot证实其具有良好的抗原性。经Ni NTA柱纯化 ,获得纯度为 93%的重组蛋白。结论 :成功地构建原核表达载体 pET32a(+) CFP10 ,并获得重组CFP10蛋白 ,为MTB重组抗原的应用奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 lhp基因 CFPIO

结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗的免疫效果观察

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第6期19卷 592-594页

作者：骆旭东朱道银陈全蒋英江山重庆医科大学微生物学教研室重庆400016

目的:研究并比较结核分枝杆菌(H37Rv)Ag85B、MPT64DNA.以及两者的融合基因(AM)的免疫原性。方法:雌性C57BL/6小鼠25只,随机分为5组,即A组(PBS)、B组(peDNA3.1)、C组(pcDNA/Ag85B)、D组(pcDNA/MPT64)和E组(pcDNA/AM)。分别于胫前肌注射7.5 g/L利多卡因和质粒混合物(1:4,100μL,含质粒70μg/次),间隔2 wk免疫 1次,共3次。末次免疫后4 wk取血分离血清测定总IgG,同时分离脾淋巴细胞,用PPD刺激后分别做脾淋巴细胞增殖实验(MTT比色法)和测定脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ的水平。结果:Ag85B、MPT64和AM质粒DNA,均能诱导小鼠产生较高水平的PPD特异性IgG。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经PPD刺激后,能产生特异性淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ。peDNA/AM组IFN-γ的分泌水平明显高于pcDNA/Ag85B和pcDNA/MPT64免疫组(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗,能在小鼠体内诱导特异性细胞和体液免疫。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B MPT64 融合基因 DNA疫苗

Ag85B与MPT64DNA疫苗联合免疫对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用

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中华结核和呼吸杂志 2004年第9期27卷 611-616页

作者：骆旭东朱道银陈全蒋英江山杨春重庆医科大学附属第一医院骨科 400016 重庆医科大学微生物教研室 400016

目的　研究Ag85B与MPT6 4DNA疫苗联合免疫对鼠结核分枝杆菌感染的免疫保护效果。方法　C5 7BL/ 6小鼠 5 4只 ,采用随机数字表法随机分为 6组 ,分别用磷酸盐缓冲液 (PBS)、pcDNA3 1(+)、卡介苗 (BCG)、pcDNA/Ag85B、pcDNA/MPT6 4、pcDNA/... 详细信息

目的　研究Ag85B与MPT6 4DNA疫苗联合免疫对鼠结核分枝杆菌感染的免疫保护效果。方法　C5 7BL/ 6小鼠 5 4只 ,采用随机数字表法随机分为 6组 ,分别用磷酸盐缓冲液 (PBS)、pcDNA3 1(+)、卡介苗 (BCG)、pcDNA/Ag85B、pcDNA/MPT6 4、pcDNA/Ag85B +pcDNA/MPT6 4经肌肉注射法免疫小鼠 ,0、3、6周各 1次 ,即PBS组、pcDNA3 1组、BCG组、pcDNA/Ag85B组、pcDNA/MPT6 4组及pcDNA/Ag85B +pcDNA/MPT6 4组。BCG组只在 0周予皮内注射卡介苗 1次。末次免疫后第 5周用 1×10 6CFU的H3 7Rv经尾静脉实施攻击 ,攻击后 6周处死部分小鼠 ,用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测血清总IgG、纯化蛋白衍生物 (PPD)特异性脾淋巴细胞干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素 4 (IL 4 )分泌水平 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法测定特异性脾淋巴细胞增殖 ;作脾、肺组织荷菌量和病理学检查 ,并观察小鼠存活时间。结果　PBS组肺和脾器官荷菌量分别为lg-1(7 85 4± 0 0 0 3)CFU/g和lg-1(7 190±0 0 16 )CFU/g、pcDNA3.1组分别为lg-1(7 70 0± 0 0 16 )CFU/g和lg-1(7 0 72± 0 0 6 8)CFU/g、BCG组分别为lg-1(6 4 4 9± 0 0 0 2 )CFU/g和lg-1(5 4 36± 0 0 4 2 )CFU/g、pcDNA/Ag85B组分别为lg-1(7 370± 0 0 0 2 )CFU/g和lg-1(6 4 2 96± 0 0 0 9)

关键词： MPT64 Ag85B 联合免疫 BCG DNA疫苗 CFU 结核分枝杆菌感染磷酸盐缓冲液组分测定

Ag85B-MPT64融合基因疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用

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中华医学杂志 2004年第8期84卷 687-691页

作者：骆旭东朱道银江山陈全蒋英重庆医科大学微生物与免疫学教研室 400016

目的　研究Ag85B MPT6 4 (AM)融合基因疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护效果。方法　C5 7BL/ 6小鼠 6 3只 ,随机分为磷酸盐缓冲液 (PBS)、空质粒、卡介苗 (BCG)、pcDNA/Ag85B、pcDNA/MPT6 4、pcDNA/Ag85B +pcDNA/MPT6 4、pcDNA/AM组 ,采... 详细信息

目的　研究Ag85B MPT6 4 (AM)融合基因疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护效果。方法　C5 7BL/ 6小鼠 6 3只 ,随机分为磷酸盐缓冲液 (PBS)、空质粒、卡介苗 (BCG)、pcDNA/Ag85B、pcDNA/MPT6 4、pcDNA/Ag85B +pcDNA/MPT6 4、pcDNA/AM组 ,采用肌肉注射法免疫小鼠 ,0、3、6周各 1次 ,BCG组只在 0周予皮内注射卡介苗 1次。末次免疫后第 5周用H37Rv经尾静脉注射实施攻击 ,攻击后 6周处死部分小鼠 ,测血清总IgG ,特异性脾淋巴细胞增殖、IFN γ及IL 4分泌水平 ;观测脾、肺组织荷菌量和病理学检查以及剩余小鼠的存活时间。结果　AM基因疫苗组诱导的特异性的IgG、脾淋巴细胞增殖和IFN γ的分泌以及肺、脾组织荷菌量、病理学改变和小鼠存活时间明显优于其他DNA疫苗单独免疫组。结论　AMDNA疫苗在抗结核分枝杆菌感染过程中具有明显的免疫保护作用。

关键词： Ag85B-MPT64融合基因 DNA疫苗结核分枝杆菌免疫疗法

重组结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6融合蛋白的制备及应用研究

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中华结核和呼吸杂志 2004年第4期27卷 244-248页

作者：陈全朱道银骆旭东蒋英江山重庆医科大学微生物学教研室 400016

目的　制备重组培养滤液蛋白 10和 6 0 0 0早期分泌性抗原靶的融合蛋白 (rCFP10 ESAT 6 ) ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法　用基因拼接 (GeneSOEing)法扩增lhp ESAT 6融合基因、并克隆入pQE30质粒 ,表达... 详细信息

目的　制备重组培养滤液蛋白 10和 6 0 0 0早期分泌性抗原靶的融合蛋白 (rCFP10 ESAT 6 ) ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法　用基因拼接 (GeneSOEing)法扩增lhp ESAT 6融合基因、并克隆入pQE30质粒 ,表达、纯化rCFP10 ESAT 6蛋白 ,通过Westernblot分析其抗原性。建立豚鼠BCG免疫模型和结核分枝杆菌强毒株 (H3 7Rv)感染模型 ,建立以融合蛋白为抗原的酶联免疫吸附测定 (ELISA)法 ,检测豚鼠血清中的抗结核分枝杆菌抗体 ,并与以纯化蛋白衍生物 (PPD)为抗原的ELISA法比较。结果　重组质粒pQE30 CFP10 ESAT 6靶基因的测序结果与预计序列 (lhp linker ESAT 6 )完全一致。融合蛋白在DH5α菌中以可溶性非包涵体形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 4 0 % ,分子质量为 2 6 0 0 0 ,纯化后的蛋白纯度为 98% ,浓度为 1 2 g/L。Westernblot分析表明 ,融合蛋白与活动性肺结核患者血清、兔抗CFP10血清和兔抗ESAT 6血清都能发生特异性免疫反应。以 10只生理盐水处理豚鼠血清的平均吸光度 (A)值 + 2s为正常界限值 ,以融合蛋白为抗原 ,11份H3 7Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应 ,11份BCG免疫豚鼠血清仅 1份呈阳性反应 ;以PPD为抗原 ,11份H3 7Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应 ,11份BCG免疫豚鼠血清也?

关键词：重组结核分枝杆菌 CFPlO-ESAT-6融合蛋白制备临床应用

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吉林市企业信息化和工业化现状及对策分析

吉林市企业信息化和工业化现状及对策分析

作者：骆旭东吉林大学

学位级别：硕士

新型工业化是以先进的信息技术改造与提升传统产业。党的十六大明确提出：信息化是我国加快实现工业化和现代化的必然选择。坚持以信息化带动工业化，以工业化促进信息化，走出一条科技含量高、经济效益好，资源消耗低，环境污染少，人...

新型工业化是以先进的信息技术改造与提升传统产业。党的十六大明确提出：信息化是我国加快实现工业化和现代化的必然选择。坚持以信息化带动工业化，以工业化促进信息化，走出一条科技含量高、经济效益好，资源消耗低，环境污染少，人力资源优势得到充分发挥的新型工业化路子。　一、信息化的内涵及意义企业信息化是国民经济信息化的主要组成部分。第二，推进企业信息化是促进我国经济增长的重要手段。第三，企业信息化是实现我国工业跨越式发展的必由之路。第四，企业信息化是促进现代企业制度形成的催化剂。第五，企业信息化是提高企业核心能力的基础。　　二、吉林市工业化、信息化的现状及分析　　（一）吉林市工业化率评价　吉林市的工业化发展轨迹与东北其他城市的变化基本一致，具有较强的地域特点，主要依托国家政策拉动和布局导向。国际通行的衡量是否完成工业化3个最主要的结构性指标，即：农业产值占GDP比重低于15%，农业就业人数占全部就业人数的比重低于20%，城镇人口比重上升到60%以上。　　　（二）吉林市的信息化率评价　　信息化率是评价一个国家、一个地区现代化程度的重要指标。一般来讲，信息化综合指数达到60%，这个国家或地区基本进入现代化。　　（三）企业信息化现状　　吉林市企业的信息化建设起步较晚，虽然有了一定的发展，但总体看，企业的信息化工作还仅仅处于初始起步阶段。三、以信息化推动新型工业化的条件和可行性分析我市经过50年，尤其是改革开放20多年的建设和发展，尽管还有这样那样的问题，但综合看，已经具备了以信息化带动工业化，进而全面推进新型工业化的条件。　　（一）五十年的工业发展和工业化的成果，为我们全面推进新型工业化打下了坚实的基础。（二）信息服务网络日趋完善，为推进新型工业化提供了完善的物质基础。　　（三）企业制度创新是我们推进新型工业化的最大动力。　　（四）推进新型工业化的有利环境初步形成。　　四、实施信息化带动工业化的总体思路和主要任务　　（一）总体思路　　（二）主要任务　　1、促进信息技术与传统产业的融合，改造、提升传统产业。　　2、大力推广和普及电子商务。　　3、鼓励和扶持发展软件业和信息服务业。　　4、抓好信息技术及产业化发展。　　5、加快企业管理模式的变革，适应经济国际化的要求　　6、大力推进信息社会化。　　五、构筑推动吉林市新型工业化的法律、政策支撑体系　　总的方针政策是：前瞻求实，统筹协调，体制创新，市场引导。　　1、统一规划和协调。　　2、加强领导，积极实施一把手工程。　　3、加快法律法规体系的建设，为信息化规范有序、健康快速发展创造一个良好的法制环境。　　4、坚持政府推动，立场引导的方向，调动方方面面的力量推进新型工业化进程。 5、重视招商引“智”，为推进新型工业化提供人才保障。 6、抓好典型示范，以点带面推进信息化的发展。　　加快信息化建设，以信息化带动工业，已成为东北地区地级市实现小康社会战略目标必然选择，这些城市要紧紧抓住振兴老北老工业基地的难得机遇，勇立潮头，蓄势后发，努力扩大信息技术应用的广度和深度，加速信息化和工业化的紧密结合，使信息化成为推动工业化的加速器，变“数字鸿沟”为“数字财富”。我们有理由相信，信息化建设在老工业基地改造调整中的不断推进与渗透，我们将进一步走实新型工业道路，形成跨越式发展的后发优势。

关键词：