mFVII／Fc融合基因慢病毒载体的构建及在hBMSCs中表达的研究

作     者：刘胜来 陈捷 王共先 汪泱 汪新辉 余刚 薛金雄 熊礼生 LIU Sheng-lai;CHEN Jie;WANG Gong-xian;WANG Yang;WANG Xin-hui;YU Gang;XUE Jin-xiong;XIONG Li-sheng

作者机构：南昌大学研究生院医学部330006 南昌大学第一附属医院泌尿外科泌尿外科研究所 

出 版 物：《中华泌尿外科杂志》 (Chinese Journal of Urology)

年 卷 期：2011年第32卷第5期

页      面：339-343页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(C160605) 江西省研究生科研创新专项资金(YC07A024) 

主　　题：凝血因子VII与Fc片段 人骨髓间充质干细胞 融合基因 慢病毒载体 

摘      要：目的构建人凝血因子VII（FVII）与免疫球蛋白Fc片段融合基因（mFVII／Fc）的慢病毒表达载体，并检测其在人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）中的表达情况，获取mFvII／Fc稳定表达的干细胞载体。方法体外克隆人凝血因子VII，用点突变技术在基因水平将341部位Lys突变为Ala后，利用DNA连接酶与免疫球蛋白IgG1 Fc片段的基因融合，经酶切整合，测序鉴定后转染人胚肾293T细胞包装为重组mFVII／Fc慢病毒载体，鉴定载体构建成功后，测定慢病毒滴度。确定转染第三代hBMSCs的最佳MOI值后批量转染，荧光显微镜下观察GFP的表达情况，RT—PCR、ELISA分别在不同时间点对mFVII／Fc的mRNA及蛋白表达进行相对定量分析。结果所构建融合基因与GenBankID：AF272774对比，除同义变异外完全相符；包装的慢病毒滴度为2×10^8TU／ml；hBMSCs鉴定结果为CD＋（98．08％）、CD＋（97．63％）、CD；（0．31％）、CD＋（0．58％）；转染hBMSCs72h后的效率为（84±3）％，经RT—PCR及ELISA证实转染mFVII／Fc基因的hBMSCs有大量mRNA转录和蛋白表达水平。结论实验成功获得了融合基因的hBMSCs稳定遗传表达载体，为靶向前列腺癌组织因子研究及肿瘤基因治疗研究提供了实验依据。