斜纹夜蛾酵母双杂交文库的构建及其在蜕皮激素受体互作蛋白筛选中的应用

作     者：范琳芳 何文婧 苏智仁 朱家明 罗威 张纯 黄立华 FAN Lin-Fang;HE Wen-Jing;SU Zhi-Ren;ZHU Jia-Ming;LUO Wei;ZHANG Chun;HUANG Li-Hua

作者机构：华南师范大学生命科学学院广州市昆虫发育调控与应用研究重点实验室广州510631 广东省农业科学研究院植物保护研究所广东省植物保护新技术重点实验室广州510640 

出 版 物：《昆虫学报》 (Acta Entomologica Sinica)

年 卷 期：2016年第59卷第8期

页      面：801-811页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31172154) 广东省自然科学基金项目(2015A030313390) 广州市科技计划项目(201510010055) 2015年广东省“大学生创新性实验计划项目” 

主　　题：斜纹夜蛾 变态发育 蜕皮激素受体 酵母双杂交文库 互作蛋白 

摘      要：【目的】蜕皮激素在昆虫变态发育中起着关键的调控作用。蜕皮激素活化为20-羟基蜕皮酮（20-hydroxyecdysone,20E）后与蜕皮激素受体二聚体〔蜕皮激素受体（ecdysone receptor,EcR）和超气门蛋白（ultraspiracle protein,USP）〕结合,启动20E诱导的级联反应。本研究旨在从互作蛋白角度探究EcR/USP自身调控的分子机理。【方法】以重要农业害虫斜纹夜蛾Spodoptera litura为研究对象,通过构建酵母双杂交筛选系统分别筛选了与EcR和USP相互作用的蛋白。【结果】文库转化效率达到3.0×106cfu/μg,文库滴度达到1.3×108cfu/m L,文库插入片段大小在500~2 000 bp之间。4种诱饵质粒（EcRA/p GBKT7,EcRB1/p GBKT7,USP1/p GBKT7和USP2/p GBKT7）对酵母细胞无毒性,并且无自激活性,说明构建的酵母双杂交文库质量可靠。用以上4种诱饵质粒筛选酵母双杂交文库,共得到110个互作蛋白,其中与EcRB1,USP1和USP2互作的蛋白分别有26,52和32个,未筛选到与EcRA互作的蛋白。随后,从中挑选了Dna J-5（Hsp40 homolog 5,一种热激蛋白分子伴侣）,MBF2（mediator of Bm FTZ-F1 type 2,一种转录共激活子）,polyubiquitin（多聚泛素类蛋白）,esr16（ecdysteroid regulated 16k Da protein,一种蜕皮激素调控蛋白）和NEDD8-like（neural precursor cell expressed,developmentally down-regulated protein 8,一种泛素调节相关蛋白）5种蛋白,利用酵母双杂交和Far-Western印迹法进一步验证了蛋白间的互作关系。【结论】分子伴侣和泛素化修饰等在蜕皮激素受体调控中可能起着重要作用。本研究对深入理解昆虫变态发育的分子机理具有重要意义。