毛果杨中链酰基辅酶A合成酶的克隆及酶学分析

作     者：曹山 蒋璐瑶 李丽红 要笑云 张强 撖静宜 王莹 李慧 陆海 CAO Shan;JIANG Lu-yao;LI Li-hong;YAO Xiao-yun;ZHANG Qiang;HAN Jing-yi;WANG Ying;LI Hui;LU Hai

作者机构：北京林业大学生物科学与技术学院 

出 版 物：《北京林业大学学报》 (Journal of Beijing Forestry University)

年 卷 期：2016年第38卷第7期

页      面：9-15页

核心收录：

学科分类：07[理学] 0713[理学-生态学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31570582 30671697 J1103516) 

主　　题：毛果杨 MACS 克隆 原核表达 酶学分析 

摘      要：中链酰基辅酶A合成酶(MACS)属于腺苷酸合成酶超基因家族,催化中链脂肪酸与辅酶A结合形成相应的中链酰基辅酶A。本研究通过同源检索毛果杨基因组数据库中的4CL基因,克隆得到毛果杨Pt MACS1的基因序列(基因编号:est Ext_fgenesh4_pg.c_640066)。通过序列分析可知,Box I和Box II两个在4CL中保守的结构域在该蛋白中并不保守。将Pt MACS1与原核表达载体p ET-30a(+)构建融合表达载体Pt MACS1-p ET-30a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导重组蛋白进行表达。镍柱纯化重组蛋白后进行酶学活性分析,研究结果表明该蛋白对中链脂肪酸己酸、壬酸、癸酸显示出明显活性:Kcat分别为(130±2.65)、(193±3.46)、(201±5.51)μmol/(min·mg),以该蛋白的最适底物癸酸测得该蛋白的最适反应温度为37℃,最适反应p H为7.0。该结果表明,Pt MACS1属于毛果杨中链酰基辅酶A合成酶家族一员,为后续毛果杨腺苷酸合成酶超基因家族的鉴定及分类分析提供资料。