羽衣甘蓝ARC1与Exo70A1蛋白相互作用结构域的分析与鉴定

作     者：曹明明 杨佳 李晓屿 李玉花 蓝兴国 CAO Ming-ming;YANG Jia;LI Xiao-yu;LI Yu-hua;LAN Xing-guo

作者机构：东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040 

出 版 物：《园艺学报》 (Acta Horticulturae Sinica)

年 卷 期：2015年第42卷第4期

页      面：791-798页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090202[农学-蔬菜学] 

基　　金：中央高校基本科研业务费专项基金项目(DL13CA13) 国家基础科学人才培养基金项目(J1210053) 

主　　题：羽衣甘蓝 自交不亲和性 ARC1 Exo70A1 结构域 

摘      要：为阐明羽衣甘蓝自交不亲和信号传递因子ARC1与下游底物Exo70A1相互作用的结构域,利用酵母双杂交系统进行检测与分析。将羽衣甘蓝Bo ARC1、Bo ARC1-N端(1~279 aa,含有UND结构域)及Bo ARC1-C端(280~663 aa,含有U-box结构域和Arm repeat结构域)的序列分别构建到p GBKT7载体中,获得BD-ARC1、BD-ARC1-N和BD-ARC1-C重组质粒。将羽衣甘蓝Bo Exo70A1、Bo Exo70A1-Δ1(1~85 aa)、Exo70A1-Δ2(1~270 aa)及Exo70A1-Δ3(271~638 aa,含有Exo70结构域)的序列分别构建到p GADT7载体中,获得AD-Exo70A1、AD-Exo70A1-Δ1、AD-Exo70A1-Δ2和AD-Exo70A1-Δ3重组质粒。将获得的重组质粒分别共转化到酵母Y187菌株中,在双缺陷(-Leu-Trp)酵母培养基中培养与生长。β-gal显色检测结果表明,共转BD-ARC1-N/Bo Exo70A1-Δ1或BD-ARC1-N/Bo Exo70A1-Δ2的酵母在滤纸上显示蓝色,这说明Bo ARC1的N端与Bo Exo70A1的N端介导了两者的相互作用。