周期型马来丝虫复合基因真核表达体系的建立

作     者：钱一言 徐怿琳 陆施娟 王慧 方浩 徐邦生 方政 

作者机构：南通大学医学院病原生物学教研室 

出 版 物：《现代预防医学》 (Modern Preventive Medicine)

年 卷 期：2013年第40卷第23期

页      面：4389-4392页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目(2012JSSPITP1571) 南通市应用研究计划(BK2012017) 

主　　题：周期型马来丝虫 3-磷酸甘油醛脱氢酶 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 复合基因 重组蛋白 

摘      要：目的将含周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(BmGAPDH)和半胱氨酸蛋白酶抑制剂(BmCPI)复合基因的重组质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH转染人宫颈癌细胞(Hela)细胞获得复合重组质粒稳定转染细胞株,并纯化所表达的重组蛋白,为研制新型的抗周期型马来丝虫重组蛋白疫苗提供理论及实验依据。方法将成功构建的pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH和空载体pcDNA3.1(+)分别转染Hela细胞,以G418筛选转染细胞,进而通过RT-PCR和SDS-PAGE鉴定G418筛选后的单克隆抗性细胞株。对阳性克隆进行无血清悬浮培养,收集细胞及其培养液。亲和层析纯化所表达的重组蛋白并通过Western-blotting对纯化的重组蛋白进行生物学鉴定。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH经转染Hela细胞,G418持续筛选14 d获得稳定表达。表达产物经Western-blotting法鉴定能够与相应的免疫鼠血清反应,相对分子质量Mr约为54×103。结论成功建立了周期型马来丝虫复合重组质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH稳定转染细胞株并获得了相应的重组蛋白。