以转染白血病抑制因子基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞

作     者：李芳菲 刘永刚 王建伟 王莎莉 王亚平 LI Fang-fei;LIU Yong-gang;WANG Jian-wei;WANG Sha-li;WANG Ya-ping

作者机构：重庆医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室重庆400016 

出 版 物：《解剖学报》 (Acta Anatomica Sinica)

年 卷 期：2007年第38卷第3期

页      面：310-314页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 0703[理学-化学] 

基　　金：国家教育部重点科技资助项目(01109) 重庆医科大学启动基金资助项目(0121418251) 

主　　题：人胚肺成纤维细胞 白血病抑制因子 饲养层 逆转录聚合酶链反应 免疫印迹法 人胚胎生殖细胞 

摘      要：目的以转染白血病抑制因子(LIF)基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞,为建立无动物成分污染的人胚胎生殖细胞培养体系奠定基础。方法将LIF真核表达载体pcDNA3.1(+)-LIF转染到人胚肺成纤维细胞中,通过筛选和鉴定获得表达LIF的阳性细胞。将原始生殖细胞(PGCs)种植到转染后细胞制备而成的饲养层上,在不添加外源性LIF的条件下培养,并对PGCs来源的细胞集落进行鉴定。结果经RT-PCR及Western blotting鉴定证实,转染pcDNA3.1(+)-LIF的人胚肺成纤维细胞表达LIF基因。在转染后人胚肺成纤维细胞上生长的PGCs可形成典型的鸟巢状集落,经检测集落碱性磷酸酶活性呈强阳性,表达胚胎阶段特异性抗原SSEA-1、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81,及未分化标志Oct-4。结论用转染LIF基因后的人胚肺成纤维细胞作为饲养层能支持PGCs来源人胚胎生殖细胞的生长,维持自我更新。