人GNAS1基因克隆、真核表达载体的构建及瞬时转染Hela细胞

作     者：李兴暖 王庭 汪涛 刘建云 熊建军 李卫东 LI Xing-nuan;WANG Ting;WANG Tao;LIU Jian-yun;XIONG Jian-jun;LI Wei-dong

作者机构：九江学院基础医学院江西省系统生物学重点实验室江西九江332000 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2014年第24卷第4期

页      面：10-13页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：江西省教育厅科学技术研究重点项目("RUNX2联合GNAS调控成骨细胞分化的研究" No.GJJ11695) 江西省自然科学基金项目("RUNX2与GNAS相互作用调控成骨细胞分化的研究" No.20122BAB205052) 江西省科技支撑计划项目("RUNX2联合GNAS调控骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化及对颌骨骨纤维异常增殖症治疗靶点的研究" No.2013BBG70075) 国家自然科学基金项目("全基因组水平RUNX2联合miRNAs CpG岛甲基化调控成骨细胞分化机制研究" No.81060075)资助 

主　　题：GNAS1 基因克隆 真核表达载体 

摘      要：目的:克隆人GNAS1基因编码区序列、构建真核表达载体并瞬时转染Hela细胞。方法:通过RT-PCR克隆GNAS1基因编码序列,亚克隆至pMD19载体,测序鉴定正确后,通过酶切连接至真核表达载体pEGFP-N1,通过菌液PCR和酶切鉴定获得pEGFP-GNAS1重组质粒;表达载体以Lipofectamine2000介导转染Hela细胞,并用实时定量PCR检测外源基因在Hela细胞中的表达。结果:克隆到GNAS1基因并获得了pEGFP-GNAS1表达载体,在Hela细胞中获得了GNAS1的过量表达。结论:成功克隆了GNAS1基因编码序列,并构建其真核表达载体,瞬时转染至Hela细胞,为进一步深入研究Gsα蛋白生物学作用奠定基础。