RNAi介导的Bip表达下调促进基于蛋白质剪接的双链共转基因细胞分泌FⅤⅢ凝血活性

作     者：朱甫祥 刘泽隆 缪静 屈慧鸽 迟晓艳 ZHU Fu-xiang;LIU Ze-long;MIAO Jing;QU Hui-ge;CHI Xiao-yan

作者机构：鲁东大学生命科学学院山东烟台264025 

出 版 物：《解剖学报》 (Acta Anatomica Sinica)

年 卷 期：2012年第43卷第5期

页      面：624-628页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 100706[医学-药理学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：山东省自然科学基金资助项目(ZR2010CM061) 烟台市科技计划项目(2008152) 教育部留学回国人员科研启动基金项目(20071108) 

主　　题：凝血因子VⅢ 免疫球蛋白重链结合蛋白 蛋白质剪接 双链转基因 免疫印迹法 酶联免疫吸附测定 发色分析法 

摘      要：目的探讨用RNA干扰技术下调内质网蛋白伴侣免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)的表达,对基于蛋白质剪接的双链共转凝血因子ⅤⅢ(FⅤⅢ)基因HEK293细胞分泌剪接FⅤⅢ蛋白的量和活性的影响。方法以培养的HEK293细胞,用含蛋白内含子的B区缺失型FⅤⅢ(BDD-FⅤⅢ)的重链和轻链基因表达载体共转染经Bip-siRNA处理的细胞,免疫印迹法检测Bip的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长,用酶联免疫吸附(ELISA)和发色分析法分析转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅤⅢ蛋白量和活性。结果 RNA干扰下调Bip表达作用明显,细胞生长不受影响;Bip下调的共转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅤⅢ和重链量分别为(142±33)μg/L和(197±43)μg/L,明显高于对照细胞[分别为(89±23)μg/L和(120±27)μg/L];Bip下调的共转基因细胞分泌的FⅤⅢ凝血活性为(1 050±160)IU/L,明显高于对照细胞[640±170(IU/L)]。结论 Bip表达下调通过促进剪接BDD-FⅤⅢ的分泌可有效提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅤⅢ基因功效,为进一步动物体内实验提供了依据。