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蛋白质剪接及在蛋白质工程中的应用

遗传 2004年第2期26卷 249-252页

作者：赫冬梅钱凯先沈桂芳浙江大学生命科学院

蛋白质剪接是蛋白质内含肽介导的,一种在蛋白质水平上翻译后的加工过程,它由一系列分子内的剪切-连接反应组成。蛋白质内含肽是一个蛋白质前体中的多肽序列,可以催化自身从蛋白质前体中断裂,使两侧的蛋白质外显肽连接成成熟的蛋白质。... 详细信息

蛋白质剪接是蛋白质内含肽介导的,一种在蛋白质水平上翻译后的加工过程,它由一系列分子内的剪切-连接反应组成。蛋白质内含肽是一个蛋白质前体中的多肽序列,可以催化自身从蛋白质前体中断裂,使两侧的蛋白质外显肽连接成成熟的蛋白质。蛋白质内含肽的发现,不仅丰富了遗传信息翻译后加工的理论,在实践中也有广泛的应用前景。

关键词：蛋白质剪接蛋白质工程蛋白质内含肽蛋白质外显肽序列

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蛋白质剪接与一类新的可移动遗传因子

生物化学与生物物理进展 1994年第6期21卷 491-494页

作者：卢柏松黄培堂北京军事医学科学院生物工程研究所

最近在几种生物体中连续发现了蛋白质剪接现象，由于它与通常所说的ＲＮＡ剪接的区别，人们称这些在蛋白质水平被剪切掉的部分为“蛋白质内含子”。有些蛋白质内含子具有核酸内切酶功能，编码蛋白质内含子的ＤＮＡ片段是一类新的可移动... 详细信息

最近在几种生物体中连续发现了蛋白质剪接现象，由于它与通常所说的ＲＮＡ剪接的区别，人们称这些在蛋白质水平被剪切掉的部分为“蛋白质内含子”。有些蛋白质内含子具有核酸内切酶功能，编码蛋白质内含子的ＤＮＡ片段是一类新的可移动遗传因子。文中介绍了目前发现的几例蛋白质剪接现象，讨论了蛋白质剪接的可能机理，分析了蛋白质内含子的进化及其生物学意义。

关键词：蛋白质剪接蛋白质内含子可移动遗传因子

蛋白质剪接在蛋白质研究和蛋白质工程中的应用

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自然杂志 2012年第1期34卷 32-38页

作者：戴旭东孟清刘相钦东华大学生物科学与技术研究所 Department of Biochemistry&Molecular Biology Faculty of Medicine Dalhousie University

蛋白质剪接(protein splicing)是由蛋白质内含子介导的在蛋白质水平上翻译后的加工过程。蛋白质内含子(in-tein)是指前体蛋白中的一段插入序列,它在蛋白质翻译后的成熟过程中能自我催化,使自身从前体蛋白中切除,并将其两侧的多肽片段以... 详细信息

蛋白质剪接(protein splicing)是由蛋白质内含子介导的在蛋白质水平上翻译后的加工过程。蛋白质内含子(in-tein)是指前体蛋白中的一段插入序列,它在蛋白质翻译后的成熟过程中能自我催化,使自身从前体蛋白中切除,并将其两侧的多肽片段以肽键连接,形成成熟的蛋白质。蛋白质内含子的发现丰富了基因表达和蛋白质翻译成熟过程的理论,而且在蛋白质研究和蛋白质工程中有广泛的应用。本文试图综述蛋白质剪接在蛋白质特异位点标记、蛋白质片段化标记同位素、蛋白质环化、蛋白质芯片、基因治疗等研究中的应用。

关键词：蛋白质剪接断裂蛋白质内含子蛋白质研究蛋白质工程

RNAi介导的Bip表达下调促进基于蛋白质剪接的双链共转基因细胞分泌FⅤⅢ凝血活性

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解剖学报 2012年第5期43卷 624-628页

作者：朱甫祥刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳鲁东大学生命科学学院山东烟台264025

目的探讨用RNA干扰技术下调内质网蛋白伴侣免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)的表达,对基于蛋白质剪接的双链共转凝血因子ⅤⅢ(FⅤⅢ)基因HEK293细胞分泌剪接FⅤⅢ蛋白的量和活性的影响。方法以培养的HEK293细胞,用含蛋白内含子的B区缺失型F... 详细信息

目的探讨用RNA干扰技术下调内质网蛋白伴侣免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)的表达,对基于蛋白质剪接的双链共转凝血因子ⅤⅢ(FⅤⅢ)基因HEK293细胞分泌剪接FⅤⅢ蛋白的量和活性的影响。方法以培养的HEK293细胞,用含蛋白内含子的B区缺失型FⅤⅢ(BDD-FⅤⅢ)的重链和轻链基因表达载体共转染经Bip-siRNA处理的细胞,免疫印迹法检测Bip的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长,用酶联免疫吸附(ELISA)和发色分析法分析转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅤⅢ蛋白量和活性。结果 RNA干扰下调Bip表达作用明显,细胞生长不受影响;Bip下调的共转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅤⅢ和重链量分别为(142±33)μg/L和(197±43)μg/L,明显高于对照细胞[分别为(89±23)μg/L和(120±27)μg/L];Bip下调的共转基因细胞分泌的FⅤⅢ凝血活性为(1 050±160)IU/L,明显高于对照细胞[640±170(IU/L)]。结论 Bip表达下调通过促进剪接BDD-FⅤⅢ的分泌可有效提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅤⅢ基因功效,为进一步动物体内实验提供了依据。

关键词：凝血因子VⅢ 免疫球蛋白重链结合蛋白蛋白质剪接双链转基因免疫印迹法酶联免疫吸附测定发色分析法

前肽缺失vWF促进细胞分泌蛋白质剪接的L303E/F309S突变体凝血第八因子

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中国细胞生物学学报 2012年第10期34卷 988-991页

作者：朱甫祥刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳鲁东大学生命科学学院烟台264025

该文旨在探索前肽缺失的von Willebrand因子(vWF-ΔPro)对蛋白质剪接的L303E/F309S突变体凝血第八因子(FVIII)分泌的影响。将vWF-ΔPro基因与蛋白内含子融合的FVIII重链和轻链基因共转HEK293细胞。结果显示,转vWF-ΔPro细胞的剪接蛋白FV... 详细信息

该文旨在探索前肽缺失的von Willebrand因子(vWF-ΔPro)对蛋白质剪接的L303E/F309S突变体凝血第八因子(FVIII)分泌的影响。将vWF-ΔPro基因与蛋白内含子融合的FVIII重链和轻链基因共转HEK293细胞。结果显示,转vWF-ΔPro细胞的剪接蛋白FVIII分泌量和活性分别为(196±27)ng/mL和(1.39±0.31)IU/mL,明显高于对照细胞的(116±24)ng/mL和(0.91±0.18)IU/mL。表明vWF-ΔPro可提高剪接的L303E/F309S突变体FVIII蛋白分泌量和活性。

关键词： vwF 凝血第八因子蛋白质剪接分泌

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蛋白质剪接研究进展

生物技术通讯 2010年第4期21卷 575-580页

作者：任元涛方宏清周长林陈惠鹏中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

蛋白质剪接是一个翻译后自催化加工过程,它不需要酶或其他辅助因子的参与。在这个过程中,前体蛋白的Intein(内含肽)被切离,其两侧的Extein(外显肽)连接在一起。Intein按结构可分为经典Intein和微型Intein,其中的经典Intein包括Hint结构... 详细信息

蛋白质剪接是一个翻译后自催化加工过程,它不需要酶或其他辅助因子的参与。在这个过程中,前体蛋白的Intein(内含肽)被切离,其两侧的Extein(外显肽)连接在一起。Intein按结构可分为经典Intein和微型Intein,其中的经典Intein包括Hint结构域和中间的归巢内切酶结构域(该结构域在微型内含肽中不存在)。蛋白质剪接及其他具有Hint结构域的蛋白加工过程的起始步骤是N-S/O酰基重排反应,该反应是由Hint结构域催化的;Intein的剪接还分为顺式剪接和反式剪接,通过对Intein进行改造,可以阻断剪接过程,但不影响N端肽键或C端肽键的断裂;通过筛选突变体,可以获得温度敏感型、pH敏感型或小分子诱导型的内含肽。这些研究促进了Intein在多肽制备及其它方面的应用。

关键词：蛋白质剪接 Intein Hint结构域多肽制备

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蛋白质剪接与一类新的可移动遗传因子

生物技术通讯 1994年第3期5卷 120-122页

作者：卢柏松黄培堂军事医学科学院生物工程所北京100850

遗传信息的流向是从DNA到RNA再到蛋白质。由于绝大多数真核生物和部分原核生物基因中都有间插序列(IVS),故遗传信息在mRNA水平有一个剪接过程,即去掉内含子,将外显子连接起来,并加帽加尾(有些mRNA还得经过编辑过程),最后成为一个有功能... 详细信息

遗传信息的流向是从DNA到RNA再到蛋白质。由于绝大多数真核生物和部分原核生物基因中都有间插序列(IVS),故遗传信息在mRNA水平有一个剪接过程,即去掉内含子,将外显子连接起来,并加帽加尾(有些mRNA还得经过编辑过程),最后成为一个有功能的mRNA分子。最近陆续发现了一类剪接现象——蛋白质剪接。

关键词：蛋白质剪接蛋白质内含子原核生物可移动遗传因子加尾间插序列编辑过程基因突变 RNA 编码区

定向进化提高微小蛋白质内含子Ter DnaE-3剪接活性的研究

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中国生物工程杂志 2012年第5期32卷 79-84页

作者：荀启静林瑛邱沛然孟清东华大学生物科学与技术研究所上海201620

目前,蛋白质内含子在蛋白质工程领域中得到越来越广泛的应用。为提高微小蛋白质内含子Ter DnaE-3(Trichodesmium erythraeum)在异源宿主中的剪接活性,采用易错PCR技术,通过改变反应体系中dNTP、Mg2+、Mn2+的浓度等手段,借助依赖卡那霉... 详细信息

目前,蛋白质内含子在蛋白质工程领域中得到越来越广泛的应用。为提高微小蛋白质内含子Ter DnaE-3(Trichodesmium erythraeum)在异源宿主中的剪接活性,采用易错PCR技术,通过改变反应体系中dNTP、Mg2+、Mn2+的浓度等手段,借助依赖卡那霉素的蛋白质内含子筛选系统进行筛选。Western印迹结果表明:通过定向进化,其中5号突变体的剪接活性从原始的约20%提高至约85%;9号突变体能够避免发生剪接副反应,即N端断裂反应。氨基酸突变位点与剪接活性变化的相关性分析表明:参与α-helix形成的氨基酸的突变极有可能影响蛋白质内含子的断裂反应,参与β-sheet形成的氨基酸的突变则有可能影响蛋白质内含子结构的紧凑性。通过定向进化提高微小蛋白质内含子Ter DnaE-3在异源宿主中的剪接活性,进一步验证依赖卡那霉素抗性的筛选系统的可行性,为扩大蛋白质内含子的应用范围奠定基础。

关键词：蛋白质内含子卡那筛选系统定向进化蛋白质剪接

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蛋白质内含子在特定氨基酸序列中的剪接

中国生物化学与分子生物学报 2016年第6期32卷 686-691页

作者：张晓刘相钦孟清东华大学生物科学与技术研究所上海201620 加拿大达尔豪斯大学生物化学与分子生物学系 HalifaxNova Scotia B3H 4R2

基因工程技术已经被广泛应用于抗体的生产。但是由于抗体的分子量较大,导致合成抗体较为困难。蛋白质内含子是前体蛋白质中的一段氨基酸序列,能够将自身剪切出来,并将两端的外显子连接形成成熟的蛋白质。将抗体的Fab(antigen-binding fr... 详细信息

基因工程技术已经被广泛应用于抗体的生产。但是由于抗体的分子量较大,导致合成抗体较为困难。蛋白质内含子是前体蛋白质中的一段氨基酸序列,能够将自身剪切出来,并将两端的外显子连接形成成熟的蛋白质。将抗体的Fab(antigen-binding fragment)和Fc(crystalline fragment)分别与蛋白质内含子(intein)的N端(I_N)和C端(I_C)融合表达,利用蛋白质内含子的剪接功能,可形成完整的抗体分子。KSCDKTH是存在于抗体铰链区(hinge region)的一段氨基酸序列,如果在KSCDKTH序列中筛选到高效剪接的蛋白质内含子,即可通过蛋白质剪接,将抗体分子的Fab和Fc剪接形成完整抗体。本文筛选发现,Ssp Dna X的3种断裂蛋白质内含子(S0,S1,S11)具有在KSCDKTH序列中高效剪接的能力,这一研究结果为抗体的剪接合成提供了可行性。

关键词：抗体铰链区断裂蛋白质内含子蛋白质剪接