轮状病毒NSP1和NSP3区插入并表达荧光素酶基因的研究

作     者：余俊杰 李杉 刘夏飞 魏潇 段招军 

作者机构：甘肃中医药大学公共卫生学院 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 伊诺维康(北京)生物科技有限公司 河南中医药大学第一临床医学院 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2025年

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(项目号:21934005) 题目:中国母乳糖组分离分析及与轮状病毒蛋白相互作用研究 

主　　题：轮状病毒 载体 反向遗传学 

摘      要：轮状病毒（Rotavirus,RV）是引起全球婴幼儿急性胃肠炎的重要病因。目前我国使用的轮状病毒疫苗为兰州生物研究所研制的口服活疫苗LLR。LLR是由羊源G10P[15]轮状病毒制备的减毒毒株。疫苗株的深入研究对新型疫苗开发具有重要意义。本研究将荧光素酶（NanoLuc Luciferase, NLuc）报告基因插入LLR/NSP1基因的ORF C端，并利用反向遗传学技术进行重组病毒拯救。通过结合dsRNA-PAGE硝酸银染色和NSP1基因RT-PCR扩增，证明成功拯救出rLLR/NSP1-NLuc重组病毒，并进一步通过间接免疫荧光、qRT-PCR、荧光素酶活性检测及病毒传代后的dsRNA-PAGE硝酸银染色实验与本实验室前期获得的重组轮状病毒rLLR/NSP3-NLuc进行病毒滴度、生长动力学、NLuc表达活性及遗传稳定性进行比较。结果显示rLLR/NSP1-NLuc的基因组拷贝数及荧光素酶活性低于rLLR/NSP3-NLuc，且两株重组病毒的P1～P5代均可检测到插入的NLuc基因片段。表明LLR的NSP1和NSP3基因节段均可稳定插入和表达NLuc，但NSP3插入NLuc后获得的重组病毒活力较NSP1更好，其表达NLuc的能力更强。本研究为进一步开展以LLR轮状病毒为疫苗载体的研究奠定了基础。