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G6P[1]型牛轮状病毒的分离培养及鉴定

中国人兽共患病学报 2024年第2期40卷 134-139页

作者：王铭月张锦华章青孔翔羽王宏孙晓曼李丹地庞立丽段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定。方法用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(... 详细信息

目的从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定。方法用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对样本VP4和VP7基因进行扩增和测序,与GenBank上的参考序列进行同源性分析,构建进化树,分析确定其G/P基因分型。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Polyacrylamine Gel Electrophoresis,PAGE)、噬斑实验和电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)等技术对分离到的病毒进行鉴定和纯化。绘制病毒生长动力学曲线。结果分离培养了1株BRV毒株,将其命名BLL。VP7和VP4基因测序结果显示此毒株为G6P[1]型轮状病毒。PAGE胶结果显示分离株电泳型为长型,条带呈现A组轮状病毒排列电泳图谱;通过噬斑实验将毒株进行了纯化。电镜检测到典型的轮状病毒颗粒。病毒生长动力学曲线可发现病毒在感染后6 h已经开始复制。结论本研究成功分离到G6P[1]型牛型轮状病毒,为研究G6P[1]型轮状病毒的病原学特征提供实验基础和技术参考。

关键词：轮状病毒 G6P 分离噬斑实验纯化序列分析

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完全基于质粒的轮状病毒反向遗传技术进展

病毒学报 2024年第4期40卷 897-906页

作者：余俊杰刘夏飞李杉段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 河南中医药大学第一临床医学院郑州450046 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

人轮状病毒(Rotavirus,RV)为双链RNA病毒,属于呼肠孤病毒科轮状病毒属,是全球5岁以下婴幼儿重症腹泻的主要病因。2017年,完全基于质粒的轮状病毒反向遗传技术获得成功,此后被不断改进。该技术可成功获得体外人工改造的特定表型的轮状病... 详细信息

人轮状病毒(Rotavirus,RV)为双链RNA病毒,属于呼肠孤病毒科轮状病毒属,是全球5岁以下婴幼儿重症腹泻的主要病因。2017年,完全基于质粒的轮状病毒反向遗传技术获得成功,此后被不断改进。该技术可成功获得体外人工改造的特定表型的轮状病毒,促进和丰富了轮状病毒感染致病机制研究以及新一代轮状病毒疫苗、药物等干预手段的开发。本文将概述和比较已报道的不同轮状病毒反向遗传技术特征,以期推动我国轮状病毒反向遗传技术体系的建立,促进我国轮状病毒的科学研究及预防控制。

关键词：轮状病毒病毒感染反向遗传

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全球轮状病毒疫苗研究进展

病毒学报 2024年第4期40卷 907-913页

作者：吴文欢孙颜红浙江大学医学院附属儿童医院实验检验中心国家儿童健康与疾病临床医学研究中心国家儿童区域医疗中心杭州310052

轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起5岁以下儿童轮状病毒胃肠炎(Rotavirus gastroenteritis,RVGE)的主要病原体,无特效药物,只能通过接种疫苗预防。本文针对目前已经上市的6种口服减毒活疫苗的开发国家,原始毒株及型别,免疫程序,适用年龄,上... 详细信息

轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起5岁以下儿童轮状病毒胃肠炎(Rotavirus gastroenteritis,RVGE)的主要病原体,无特效药物,只能通过接种疫苗预防。本文针对目前已经上市的6种口服减毒活疫苗的开发国家,原始毒株及型别,免疫程序,适用年龄,上市时间及国家,疫苗形式及保存方式,所致不良反应以及影响疫苗保护效力的因素进行了综述,并且整理了正在研发的6种新疫苗的研究进展。世界各地的疫苗接种率相差很大,其中的中低收入国家的疫苗接种率都偏低,在加强宣教工作的同时,也需要探究影响疫苗有效性的因素,并对现有疫苗进行改进以降低副反应提升安全性,进而推动新型疫苗的研发,对降低婴幼儿RVGE的患病率与死亡率,降低医疗经济负担有重要的作用。

关键词：轮状病毒疫苗胃肠炎儿童

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中国中南部G8P[8]型A组轮状病毒全基因组遗传特征研究

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病毒学报 2024年第1期40卷 27-37页

作者：熊光萍田毅范佳欣唐晓苹董梦洁车如意李伟红唐梅荣周珺刘颂王铭月李丹地段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 沧州医学高等专科学校病原生物学与免疫学教研室沧州061001 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 北京市疾病预防控制中心北京100013 广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530028 江西省疾病预防控制中心南昌330046 青岛市疾病预防控制中心青岛266033

G8基因型轮状病毒已在我国出现并迅速增加。本研究拟对采集于中国中南部5岁以下急性胃肠炎患儿的7例G8P[8]型RVA毒株进行全基因组分子特征分析。对轮状病毒特异性扩增结合高通量测序方法对中国中南部14株G8P[8]型RVA毒株进行全基因组测... 详细信息

G8基因型轮状病毒已在我国出现并迅速增加。本研究拟对采集于中国中南部5岁以下急性胃肠炎患儿的7例G8P[8]型RVA毒株进行全基因组分子特征分析。对轮状病毒特异性扩增结合高通量测序方法对中国中南部14株G8P[8]型RVA毒株进行全基因组测序。利用MEGA11.0、Geneious Prime、Geneious9.0.2和DNASTAR软件对RVA毒株进行全序列及遗传变异和进化分析。7株G8P[8]型RVA的基因分型为G8-P[8]-I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E1-H2,显示为DS-1样基因型。系统进化树结果显示,本研究中国中南部7株G8P[8]分为两大谱系G8-I(13株)和谱系G8-Ⅱ(1株),VP7的最大分支可信度(MCC)树表明,G8的平均进化率估计为1.4×10^(-3)替换/位点/年。G8P[8]基因型RVA在我国包括两个谱系,从该病毒在中国的出现到该病毒在中国的流行传播将经过1~2年,持续的全国RVA监测至关重要。

关键词：轮状病毒 G8P基因型分子特征平均进化率

益生菌结合蒙脱石散对轮状病毒感染乳鼠肠道黏膜、肠道微生物功能相关基因表达的影响

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中国临床药理学杂志 2024年第13期40卷 1903-1907页

作者：赵林徐沙沙郭伟胜刘鹏席作武河南省中医院、河南中医药大学第二附属医院普外二科河南郑州450002 河南省中医院、河南中医药大学第二附属医院肛肠科河南郑州450002 河南省儿童医院呼吸内科河南郑州450018

目的分析益生菌结合蒙脱石散对轮状病毒(RV)感染乳鼠肠道黏膜、肠道微生物功能相关基因表达的影响。方法用灌胃SA11株轮状病毒构建RV感染模型。将48只乳鼠随机分为正常组(0.9%NaCl)、模型组(0.9%NaCl)、实验组(0.06 g·mL^(-1)蒙脱石散... 详细信息

目的分析益生菌结合蒙脱石散对轮状病毒(RV)感染乳鼠肠道黏膜、肠道微生物功能相关基因表达的影响。方法用灌胃SA11株轮状病毒构建RV感染模型。将48只乳鼠随机分为正常组(0.9%NaCl)、模型组(0.9%NaCl)、实验组(0.06 g·mL^(-1)蒙脱石散)和联合组(0.06 g·mL^(-1)蒙脱石散+6.5×10~7 CFU·mL^(-1)布拉氏酵母菌散),每组12只。4组乳鼠每天给药1次,连续给药5 d。收集粪便进行评价,用酶联免疫吸附试验法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-17水平,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测肠道组织中水通道蛋白(AQP)水平,用细菌16srDNA荧光定量聚合酶链反应法检测粪便中双歧杆菌和大肠埃希菌含量。结果正常组、模型组、实验组和联合组的粪便评分分别为(1.01±0.10)、(2.97±0.08)、(2.84±0.03)和(2.77±0.03)分,TNF-α水平分别为(132.54±14.63)、(185.66±19.64)、(165.25±17.63)和(149.95±15.76)pg·mL^(-1),IL-1β水平分别为(172.32±18.68)、(265.34±27.72)、(202.34±21.34)和(186.24±19.46)pg·mL^(-1),IL-17水平分别为(118.62±12.44)、(173.24±18.25)、(152.32±16.72)和(122.54±13.58)pg·mL^(-1),AQP2 mRNA表达水平分别为1.02±0.05、0.72±0.07、0.89±0.08和1.21±0.12,AQP4 mRNA表达水平分别为1.04±0.07、0.42±0.05、0.78±0.08和1.19±0.12,AQP8 mRNA表达水平分别为1.00±0.06、0.63±0.06、0.91±0.09和1.30±0.13,双歧杆菌含量分别为(6.35±0.64)、(4.31±0.44)、(4.93±0.50)和(5.34±0.54)CFU·g^(-1),大肠埃希菌含量分别为(6.14±0.62)、(8.78±0.88)、(8.46±0.85)和(8.12±0.83)CFU·g^(-1)。模型组的上述指标和实验组、联合组、正常组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论蒙脱石散联合益生菌干预RV感染乳鼠可改善粪便性状,降低血清炎症因子水平,纠正肠道菌群紊乱,其可能是通过改善肠道AQP2、AQP4和AQP8表达实现的。

关键词：益生菌蒙脱石散轮状病毒肠道黏膜肠道微生物

轮状病毒抗原定量参比品的研制及抗原含量双抗体夹心ELISA的验证

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微生物学免疫学进展 2024年第3期52卷 26-33页

作者：宋菲菲马莹杨洋张立杰杜琳邹强北京智飞绿竹生物制药有限公司病毒性疫苗研发中心北京100176

目的制备轮状病毒抗原定量参比品,建立检测轮状病毒抗原含量的双抗体夹心ELISA,并进行验证及初步应用。方法参照轮状病毒灭活疫苗生产工艺制备轮状病毒抗原定量参比品,以轮状病毒多克隆抗体为包被抗体,以轮状病毒单克隆抗体为检测抗体,... 详细信息

目的制备轮状病毒抗原定量参比品,建立检测轮状病毒抗原含量的双抗体夹心ELISA,并进行验证及初步应用。方法参照轮状病毒灭活疫苗生产工艺制备轮状病毒抗原定量参比品,以轮状病毒多克隆抗体为包被抗体,以轮状病毒单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA,对建立的方法进行线性、准确度、精密度、专属性、预包板稳定性及参比品稳定性验证;将验证后的该方法初步应用于轮状病毒灭活疫苗制备工艺的监控及产品质量分析。结果制备的轮状病毒抗原参比品纯度>95%,2~8℃贮存稳定性不低于12个月。建立的双抗体夹心ELISA,标准曲线线性范围3.75~120.00 U/mL;包被抗体和检测抗体的质量浓度分别为2μg/mL和100 ng/mL;各质量浓度抗原回收率均在90.5%~109.8%;不同质量浓度样品检测结果的实验内CV在1.9%~6.3%,实验间CV在4.4%~7.2%;与Vero细胞蛋白、DMEM细胞培养液、新生牛血清、EV71抗原、CA16抗原无交叉反应;预包板于2~8℃放置21 d,抗原回收率均在91.0%~110.2%,CV均病毒澄清、超滤及第一步柱层析抗原回收率均在83.6%~93.1%;第二步柱层析和原液制备工序抗原回收率分别为62.2%和70.7%。结论制备的轮状病毒抗原内参品纯度、稳定性均符合用于轮状病毒抗原定量标定的要求;建立的轮状病毒抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的线性、准确度、精密度和专属性。用该方法进行轮状病毒抗原含量检测可作为轮状病毒灭活疫苗制备过程中各工艺质量控制的重要指标。

关键词：轮状病毒抗原标准品双抗体夹心法酶联免疫吸附测定验证质量控制

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轮状病毒疫苗免疫效果影响因素研究进展

中华实验和临床病毒学杂志 2024年第2期38卷 224-230页

作者：车如意李丹地中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

轮状病毒(Rotavirus,RV)是导致全球5岁以下儿童重度胃肠炎最常见的病原之一,接种RV疫苗是控制婴幼儿轮状病毒腹泻最有效的措施。RV疫苗在不同收入水平国家的免疫效果存在差异,本研究对影响RV疫苗免疫效果的因素进行系统阐述,为RV疫苗的... 详细信息

轮状病毒(Rotavirus,RV)是导致全球5岁以下儿童重度胃肠炎最常见的病原之一,接种RV疫苗是控制婴幼儿轮状病毒腹泻最有效的措施。RV疫苗在不同收入水平国家的免疫效果存在差异,本研究对影响RV疫苗免疫效果的因素进行系统阐述,为RV疫苗的研究及免疫策略的制定提供参考。

关键词：轮状病毒疫苗腹泻

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轮状病毒感染机制研究进展

临床医学进展 2024年第2期14卷 3825-3833页

作者：韩郝涛杨学磊新疆医科大学研究生院新疆乌鲁木齐新疆维吾尔自治区人民医院医学研究与转化中心新疆乌鲁木齐

轮状病毒是世界范围内引起儿童腹泻死亡的最重要的病原体之一。其感染机制一直是研究热点,近年来在分子水平及免疫学等方面已取得了显著进展。本文对轮状病毒的一般生物学特征进行了描述,并对轮状病毒感染与宿主之间的相关免疫反应以及... 详细信息

轮状病毒是世界范围内引起儿童腹泻死亡的最重要的病原体之一。其感染机制一直是研究热点,近年来在分子水平及免疫学等方面已取得了显著进展。本文对轮状病毒的一般生物学特征进行了描述,并对轮状病毒感染与宿主之间的相关免疫反应以及轮状病毒编码蛋白(包括结构蛋白和非结构蛋白)在感染中的作用的研究进展加以综述。

关键词：轮状病毒致病机制结构蛋白非结构蛋白

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轮状病毒的检测方法及综合防控

中国畜牧业 2024年第4期 90-91页

作者：李群杰山东省寿光市羊口镇畜牧兽医工作站

轮状病毒(PORV)是导致仔猪腹泻的重要病原体之一。它能够引起多种小动物和新生婴儿腹泻,主要通过粪便和口腔传播。临床上常表现为腹泻、食欲不振甚至消瘦和嗜睡等症状。随着规模化猪场的兴起,世界上许多国家和地区都发现了轮状病毒导致... 详细信息

轮状病毒(PORV)是导致仔猪腹泻的重要病原体之一。它能够引起多种小动物和新生婴儿腹泻,主要通过粪便和口腔传播。临床上常表现为腹泻、食欲不振甚至消瘦和嗜睡等症状。随着规模化猪场的兴起,世界上许多国家和地区都发现了轮状病毒导致的相关腹泻疾病,对养猪业的发展产生了严重影响,并造成了巨大的经济损失。因此,采用快速准确的检测方法对该疫病进行防控和治疗至关重要。笔者对猪源轮状病毒检测方法的研究进展进行了综述,总结了已有的猪源轮状病毒检测方法的原理、优缺点等,以期为临床上轮状病毒的防治提供重要指导。

关键词：轮状病毒腹泻疾病养猪业规模化猪场仔猪腹泻婴儿腹泻检测方法综合防控