GL-7-ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

作     者：杨蕴刘 恽定芳 关颖谦 彭惠林 陈剑民 何云生 焦瑞身 Yang Yunliu;Yun Dinfang;Guan Yingqian;Peng Huilin;Chen Jianmin;He Yunsheng;Jiao Ruishen Shanghai Institute of Plant Physiology, Academia Sinica, Shanghai

作者机构：中国科学院上海植物生理研究所 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：1991年第7卷第2期

页      面：99-107页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：7-ACA酰化酶 基因克隆 基因表达 

摘      要：本文报道了利用BamHI酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps.130染色体DNA片段构建重组质粒,并用^(32)P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经^(125)I一标记的抗体/抗原放射免疫反应、GL-7-ACA酰化酶活力测定以及酶反应产物的纸谱色层分析,由上述7株阳性株中鉴定出3株能在大肠杆菌中表达酰化酶活力的基因克隆株。对该3株菌的重组质粒——pMR 5、pMR 6和pMR7 DNA的初步凝胶电泳分析表明,pMR 5和pMR 7质粒中插入片段的分子量为6.8kb,质粒pMR 6则带有5.7kb的外源片段。实验还比较了重级质粒pMR5在8株不同的大肠杆菌宿主菌中,GL-7-ACA酰化酶的表达水平。