PIWIL4的克隆及其抗体制备和初步应用

作     者：苏畅 浦永 孔鹏洲 王萌 刘民 汤华 SU Chang;PU Yong;KONG Peng-zhou;WANG Meng;LIU Min;TANG Hua

作者机构：天津医科大学基础医学院天津市生命科学中心实验室300070 

出 版 物：《国际免疫学杂志》 (International Journal of Immunology)

年 卷 期：2010年第33卷第3期

页      面：237-241页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：基金项目:国家高新技术研究发展计划(863)项目(2007AA021808) 国家自然科学基金资助项目(30873017) 天津市自然科学基金重点项目(09JCZDJC17500) 

主　　题：PIWIL4 原核表达 抗体 肿瘤 

摘      要：目的制备兔抗人PIWIL4的多克隆抗体，鉴定其特异性，并应用该抗体检测内源性PIWIL4在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。方法构建原核表达质粒***4，转化大肠杆菌BL21，PIWIL4蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。融合蛋白通过切胶纯化后免疫家兔制备抗体血清。以间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗体效价，Westernblot鉴定抗体特异性及检测PIWIL4在各细胞系中的表达差异，免疫荧光染色观察PIWIL4的细胞定位。结果成功构建原核表达质粒，表达并纯化PIWIL4蛋白。免疫大白兔后得到PIWIL4多克隆抗体，ELISA检测抗体效价为1：20000，Westernblot和免疫组化确定抗体具有高度特异性，并成功地应用该抗体检测到PIWIL4在人多种细胞系中的表达差异及细胞定位。结论PIWIL4蛋白及其多克隆抗体的成功制备，为进一步研究PIWIL4的生物学功能奠定了基础。