含IL-24基因重组慢病毒表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用

作     者：周峰 张海清 史震 孙伟 汤仁仙 郑葵阳 

作者机构：徐州医学院病原生物学与免疫学教研室221004 徐州医学院肿瘤生物治疗重点实验室 

出 版 物：《江苏医药》 (Jiangsu Medical Journal)

年 卷 期：2010年第36卷第19期

页      面：2300-2302页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：江苏省高校自然科学研究指导性课题(09KJD310012) 徐州医学院院课题(08KJ09) 徐州医学院肿瘤生物治疗重点实验室开放课题(C0808) 

主　　题：慢病毒载体 白细胞介素24 肝癌 

摘      要：目的探讨白细胞介素(IL)24基因表达目的蛋白IL-24的方法,检测IL-24对肝癌细胞生长的影响。方法自经5μg/ml植物血凝素(PHA)刺激的正常人单个核细胞(PBMCs)中提取总RNA,RT-PCR扩增出IL-24cDNA,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen中构建成慢病毒转移载体pHAGE-IL-24,转染HEK293T细胞。荧光显微镜观察293T细胞中绿色荧光蛋白(GFP)表达;梯度稀释法测定病毒滴度,感染HEK293T细胞48h后进行RT-PCR和Westernblot检测IL-24的基因和蛋白表达;MTT法检测细胞的增殖。结果限制性内切酶检测和基因测序证实成功构建了携带IL-24基因的慢病毒表达载体,滴度为5×106TU/ml。以MOI为5.0的重组慢病毒感染靶细胞HepG248h后,能够检测到外源基因IL-24的蛋白表达。IL-24能够抑制肝癌细胞的生长。结论成功构建了含IL-24基因的慢病毒表达载体,获得的病毒能够有效感染HepG2细胞,并在其中大量表达目的蛋白;IL-24能够抑制肝癌细胞的生长。