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FK506和201A防治大鼠抗GBM肾炎的实验研究

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FK506和201A防治大鼠抗GBM肾炎的实验研究

作者：汤仁仙苏州大学

学位级别：硕士

目的：观察FK506和201A防治大鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎的疗效。方法：建立大鼠抗GBM肾炎模型，实验分四组：FK506处理组、201A处理组、肾炎模型组及正常对照组。大鼠一次性尾静脉注射抗GBM抗血清(即肾毒血清)后6h内开始给药(FK50... 详细信息

目的：观察FK506和201A防治大鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎的疗效。方法：建立大鼠抗GBM肾炎模型，实验分四组：FK506处理组、201A处理组、肾炎模型组及正常对照组。大鼠一次性尾静脉注射抗GBM抗血清(即肾毒血清)后6h内开始给药(FK506给药剂量为0.5mg/kg/d-1，201A给药剂量为0.42g/kg/d)，直至第21d，对照组则给予等量的生理盐水。定期于第4d、14d、21d检测大鼠尿蛋白、血肌酐及血尿素的含量;肾组织病理学改变;血清总补体活性(CH50)、血清循环免疫复合物(CIC)、T淋巴细胞转化功能及血清中抗GBM的自身抗体。结果：(1)大鼠抗GBM肾炎模型组：给大鼠注射抗GBM抗血清后于第4d出现大量蛋白尿;第14d血肌酐和血尿素显著升高，并持续上升;肾组织病理表现为肾小球内细胞数明显增加，大量新月体形成及肾小管内蛋白管型，GBM呈不规则增厚，足突融合，内皮细胞脱落、坏死;免疫荧光检查见兔IgG、鼠IgG沿GBM线形分布。第4d测血清CH50明显低于正常组;而此时T淋巴细胞转化功能明显高于正常组，并于第14d血中检测到高滴度的抗GBM自身抗体。(2)药物疗效：两种药物分别用于防治大鼠抗GBM肾炎，结果显示大鼠尿蛋白水平、血肌酐及血尿素含量明显较肾炎模型组降低;肾小球内细胞总数、新月体数及肾小管内蛋白管型亦较肾炎模型组明显减少;GBM的厚度低于肾炎模型组;足突融合及内皮细胞病变明显好转。实验第4d、14d均发现，大鼠体内T淋巴细胞转化功能两种药物处理组明显低于肾炎模型组，此外，第14d测血清中抗GBM自身抗体的阳性例数及滴度均较肾炎模型组降低，第21d血清CIC单位数亦较肾炎模型组低下。另两种药物处理组间疗效无显著性差异。结论：FK506和201A均能明显改善大鼠抗GBM肾炎的肾功能。

关键词：大鼠抗GBM肾炎模型 FK506 201A

4种肾炎模型大鼠尿液中补体C5b-9复合物排泄的比较研究

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中国病理生理杂志 2003年第1期19卷 92-96,I003页

作者：王迎伟简洁汤仁仙黄水平南京医科大学免疫学教研室江苏徐州医学院免疫学教研室江苏徐州221002 江苏徐州医学院统计学教研室江苏徐州221002

目的 :探讨不同类型的免疫复合物肾炎大鼠尿液中补体C5b - 9复合物检出的意义。方法 :复制大鼠被动型Heymann肾炎 (PHN)、抗胸腺细胞血清性肾炎 (ATSN)、抗肾小球基底膜性肾炎(AGBMN)及慢性血清病肾炎 (CSDN) 4种动物模型。用双抗体夹心... 详细信息

目的 :探讨不同类型的免疫复合物肾炎大鼠尿液中补体C5b - 9复合物检出的意义。方法 :复制大鼠被动型Heymann肾炎 (PHN)、抗胸腺细胞血清性肾炎 (ATSN)、抗肾小球基底膜性肾炎(AGBMN)及慢性血清病肾炎 (CSDN) 4种动物模型。用双抗体夹心ELISA法定期检测各种肾炎大鼠血液及尿液中补体C5b - 9的含量 ,同时观察大鼠肾小球中C5b - 9的沉积情况。结果 :4种肾炎模型鼠血浆C5b - 9复合物均见上升 ,肾小球内也有C5b - 9复合物的沉积 ,但尿液中C5b - 9含量升高仅见于罹患PHN的大鼠。此外 ,尿液中C5b - 9复合物的升高先于PHN大鼠尿蛋白的升高。结论 :尿液中C5b -

关键词：肾炎大鼠尿液补体 C5b-9复合物比较研究

幽门螺杆菌临床菌株主要蛋白抗原表达及其诱导宿主产生抗体差异性的研究

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浙江大学学报（理学版） 2009年第1期36卷 90-96页

作者：朱莲汤仁仙邵健忠浙江大学生命科学学院浙江杭州310058 徐州医学院病原生物学教研室江苏徐州221000

建立了基于幽门螺杆菌重组蛋白抗原rUreB、rHpaA、rVacAr、CagA1、rNapA、rFlaA和rFlaB的ELISAs,用于检测幽门螺杆菌临床菌株上述抗原表达率和幽门螺杆菌感染病人血清IgG阳性率,另采用PCR检测临床菌株中上述抗原编码基因携带率,以期为... 详细信息

建立了基于幽门螺杆菌重组蛋白抗原rUreB、rHpaA、rVacAr、CagA1、rNapA、rFlaA和rFlaB的ELISAs,用于检测幽门螺杆菌临床菌株上述抗原表达率和幽门螺杆菌感染病人血清IgG阳性率,另采用PCR检测临床菌株中上述抗原编码基因携带率,以期为选择幽门螺杆菌基因工程疫苗抗原提供依据.实验结果显示,rUreB、rHpaA、rVacAr、CagA1、rNapA、rFlaA和rFlaB表达量分别约为细菌总蛋白的35%、32%、15%、23%、56%、25%和20%.各重组抗原均能与商品化幽门螺杆菌抗血清(DAKO)产生阳性Western Bolt结果,免疫家兔能产生特异性抗体.从332例慢性胃炎或消化性溃疡病人胃黏膜活检标本中,分离获得145株幽门螺杆菌,其阳性率为43.8%.所有幽门螺杆菌临床菌株均表达UreB、HpaA、FlaA和FlaB,52.4%、91.7%和93.1%菌株分别表达VacA、CagA和NapA.145例幽门螺杆菌感染的病人血清中,UreB、HpaA、VacA、CagA、NapA、FlaA和FlaB的IgG抗体阳性率分别为100%、86.9%、42.8%、70.3%、89.7%、84.8%和79.3%.此外,不同胃疾病标本中幽门螺杆菌分离率均无显著性(P>0.05),但菌株VacA和NapA表达率与疾病严重程度相关(P<0.05).综合分析实验结果,UreB是研制幽门螺杆菌基因工程疫苗首选抗原,其次是NapA和HpaA;各病种与幽门螺杆菌感染率无关,但与菌株毒力有关.

关键词：幽门螺杆菌主要蛋白抗原表达频率抗体水平

抗胸腺细胞血清性肾炎模型大鼠肾小球中C5b-9的沉积及NO、TNFα含量分析

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中国病理生理杂志 2004年第1期20卷 54-59页

作者：王迎伟徐静华汤仁仙高丰光南京医科大学免疫学教研室江苏南京210029 徐州医学院免疫学教研室江苏徐州221002

目的 :探讨抗胸腺细胞血清性肾炎 (ATSN)大鼠肾小球内C5b -9复合物的沉积与某些炎症介质和细胞因子如 :一氧化氮 (NO)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量情况。方法 :大鼠一次性静脉注射抗胸腺细胞抗血清(ATS)建立ATSN模型 ,定期对ATSN大鼠... 详细信息

目的 :探讨抗胸腺细胞血清性肾炎 (ATSN)大鼠肾小球内C5b -9复合物的沉积与某些炎症介质和细胞因子如 :一氧化氮 (NO)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量情况。方法 :大鼠一次性静脉注射抗胸腺细胞抗血清(ATS)建立ATSN模型 ,定期对ATSN大鼠肾小球中的补体C5b -9复合物进行免疫组化染色定位、显微图像扫描半定量分析 ;并对有C5b -9包绕的肾小球系膜细胞 (MC)进行计数。测定ATSN大鼠肾中诱生型NO合酶 (iNOS)mRNA的表达、尿液中NO的代谢产物 (NO-2 /NO-3 )及TNFα的排泄量。结果 :ATSN模型大鼠肾小球MC先溶解坏死后继发增生 ,病变早期 (溶解时相 )补体C5b -9复合物主要定位于肾小球系膜区及MC表面 ;随着病程的进展 ,被C5b -9包绕的MC逐渐减少 ,病程初期ATSN大鼠肾小球MC有明显的iNOSmRNA表达 ,尿液中NO-2 /NO-3 和TNFα的排泄量也明显增加。在ATSN病变的增生阶段 (一般 7d后 ) ,上述指标的变化逐渐趋缓。结论 :ATSN模型大鼠肾小球中MC逐渐溶解与补体C5b

关键词：抗胸腺细胞血清性肾炎补体膜攻击复合物一氧化氮肿瘤坏死因子α 大鼠肾小球 C5b-9 NO TNFα

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大鼠脑组织高尔基染色三种制备方法的比较

临床与实验病理学杂志 2017年第1期33卷 113-115页

作者：王蕾张芳汤仁仙张冠群牛海晨徐州医科大学基础医学院形态学实验教学中心徐州221004 东南大学医学院附属徐州中心医院神经内科徐州221009 徐州医科大学基础医学院遗传学教研室徐州221004

1873年意大利著名的神经解剖学家卡米洛·高尔基发明硝酸银染色法，从此可以定性定量地观察神经元的形态。随后Cox等心对高尔基染色法的固定液和染色液进行改良，提高结果的可视性，但初学者选择合适的染色方法仍较为困难。本实验采用... 详细信息

1873年意大利著名的神经解剖学家卡米洛·高尔基发明硝酸银染色法，从此可以定性定量地观察神经元的形态。随后Cox等心对高尔基染色法的固定液和染色液进行改良，提高结果的可视性，但初学者选择合适的染色方法仍较为困难。本实验采用相同的固定、染色和显色液.

关键词：脑组织高尔基染色法冷冻切片振动切片石蜡切片

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肾小球肾炎免疫致病因素的研究进展

徐州医学院学报 2002年第2期22卷 181-184页

作者：汤仁仙徐州医学院免疫学教研室江苏徐州221002

概述某些免疫因素如抗体、补体、免疫细胞及细胞因子参与或介导肾小球肾炎组织损伤的研究进展。

关键词：肾小球肾炎抗体补体免疫细胞细胞因子致病因素研究进展

川芎嗪对大鼠被动型Heymann肾炎病变的影响

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基础医学与临床 2000年第1期20卷 74-76页

作者：王迎伟汤仁仙董红燕江苏徐州医学院电镜室徐州221002 江苏徐州医学院兔疫教研室

建立ＳＤ大鼠典型的被动型Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＰＨＮ）模型，观察川芎嗪对肾内血栓素Ａ２（ＴｘＡ２）．前列环素Ｉ２（ＰＧＩ２）及ＴＸＡ２－ＰＧＩ２平衡的影响。结果表明：川穹嗪能够降低大鼠尿中的ＴＸＡ２而提高ＰＧＩ２的含量... 详细信息

建立ＳＤ大鼠典型的被动型Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＰＨＮ）模型，观察川芎嗪对肾内血栓素Ａ２（ＴｘＡ２）．前列环素Ｉ２（ＰＧＩ２）及ＴＸＡ２－ＰＧＩ２平衡的影响。结果表明：川穹嗪能够降低大鼠尿中的ＴＸＡ２而提高ＰＧＩ２的含量。此外，对于减少尿蛋白的分泌及肾组织学的损伤也有一定的作用。提示川芎嗪可用于ＰＨＮ病变的防治。

关键词： Heymann肾炎川芎嗪血栓素前列环素

梅毒螺旋体TpN17与TpN47表位肽融合抗原的重组表达及其酶联免疫吸附试验的建立和应用

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生物工程学报 2009年第8期25卷 1187-1194页

作者：孙爱华范兴丽沈香娣汤仁仙严杰浙江医学高等专科学校基础医学部杭州310053 徐州医学院病原生物学教研室徐州221002 浙江大学医学院病原生物学系杭州310058

以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成... 详细信息

以重组TpNs为抗原的ELISAs已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法,若ELISAs使用多种TpNs抗原,可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果,本研究首先采用连接引物PCR获得了TpN17和TpN47抗原表位序列融合成的人工基因片段tpE17-47,然后构建了全长tpN17、tpN47基因以及tpE17-47融合基因的原核表达系统。SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查结果显示,所构建的原核表达系统能稳定表达目的重组蛋白rTpN17、rTpN47和rTpE17-47,其产量分别约占细菌总蛋白的36%、20%和28%。采用Ni-NTA亲和层析法提纯的rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白经SDS-PAGE分析,均显示为单一的蛋白条带。Western blotting结果表明,rTpN17、rTpN47和rTpE17-47蛋白均可被梅毒抗体阳性的病人血清所识别。以rTpE17-47为包被抗原的rTpE17-47-ELISA检测630例临床确诊梅毒患者血清标本的阳性率为98.6%,仅略高于TPPA(97.9%)(P>0.05),但明显高于rTpN17-ELISA(83.8%)、rTpN47-ELISA(83.3%)和RPR(72.1%)(P<0.01)。上述ELISAs和TPPA对25例SLE、36例RA患者和250例健康体检者的血清标本检测结果均为阴性,但RPR分别有1、2和2例标本检测结果为阳性。本试验成功地构建了rTpE17-47抗原表位融合基因及其高效原核表达系统,所建立的rTpE17-47-ELISA可作为一种快速、简便、安全、敏感和特异的梅毒血清学筛查或诊断新方法。

关键词：梅毒螺旋体抗原表位融合基因重组表达酶联免疫吸附试验

Sonic Hedgehog(SHH)促进胶原蛋白诱导关节炎大鼠滑膜成纤维细胞的增殖

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第5期32卷 630-634页

作者：李慧秦苏萍孙德旭潘伟李向阳孔凡运郑葵阳汤仁仙徐州医学院病原生物学与免疫学教研室、感染与免疫实验室江苏徐州221004 徐州医学院人体解剖学教研室江苏徐州221004

目的探讨Sonic Hedgehog(SHH)在滑膜成纤维细胞增殖中的作用。方法收集类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、强直性脊柱炎(AS)患者及健康正常人血清样本各(30例),ELISA检测上述血清SHH的含量。SD大鼠皮内注射2型胶原蛋白(Col2)诱... 详细信息

目的探讨Sonic Hedgehog(SHH)在滑膜成纤维细胞增殖中的作用。方法收集类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、强直性脊柱炎(AS)患者及健康正常人血清样本各(30例),ELISA检测上述血清SHH的含量。SD大鼠皮内注射2型胶原蛋白(Col2)诱导RA大鼠模型(CIA),取其滑膜组织原代培养滑膜成纤维细胞(SF)。免疫荧光细胞化学染色法检测vimentin表达鉴定SF,并检测SHH在SF中的表达。培养SF给予SHH-胶质瘤相关癌基因1(Gli-1)通路特异性阻断剂GANT61处理72 h,Western blot法检测SF表达SHH的变化情况,CCK-8法检测SF的增殖情况。结果 RA患者血清中SHH的含量较SLE、AS患者及正常组含量升高。成功建立CIA模型及分离培养SF;CIA-SF表达SHH较正常组SF高。给予GANT61处理72 h,CIA-SF中SHH蛋白表达降低且细胞增殖水平下降。结论 SHH参与RA发病与CIA-SF增殖有关。

关键词：滑膜成纤维细胞细胞增殖 SHH