桃拉综合征病毒CP2蛋白的克隆表达及其结合肽的噬菌体肽库筛选

作     者：黄新新 陆承平 孔繁德 蔡强 HUANG Xin-Xin;LU Cheng-Ping;KONG Fan-De;CAI Qiang

作者机构：浙江清华长三角研究院生态环境研究所嘉兴314006 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 厦门出入境检验检疫局厦门361012 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2013年第29卷第11期

页      面：1155-1160页

核心收录：

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

基　　金：浙江省自然科学基金研究项目(LY12C01001)资助 

主　　题：桃拉综合征病毒(TSV) CP2蛋白 克隆表达 噬菌体展示肽库 配体 

摘      要：目的：克隆表达出桃拉综合征病毒（TSV）主要衣壳蛋白CP2蛋白,并通过对噬菌体随机肽库的淘选,得到与CP2蛋白结合的相关多肽,以探讨CP2蛋白与配体作用的特异位点。方法：根据重组质粒pMD-CP2的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,扩增TSV CP2基因高变区376~1 371 bp,扩增片段插入pET-32构建成原核表达载体pET-CP2。该重组载体在IPTG诱导下进行可溶性表达,SDS-PAGE电泳检测表达的CP2蛋白。以纯化的CP2蛋白作为筛选分子,对噬菌体展示12肽库进行亲和淘选。结果：原核表达出56 kD大小的CP2蛋白,对噬菌体12肽库4轮＂吸附-洗脱-扩增＂淘洗后,所得的噬菌体回收率逐步提高,由6.4×10-5上升到2.8×10-2,显示淘选过程对随机肽库有很好的富集效果。随机挑选第4轮淘筛后的36个单克隆噬菌体,ELISA鉴定有24个单克隆（66.6%）为强阳性。将这24个阳性克隆扩增、测序,推导随机多肽的氨基酸序列。分析发现,有7个克隆（克隆号2、6、7、9、18、20、33）完全一致,序列为HTSFCSTHLCLI,其它的几个克隆如克隆3及28序列为HCSNLFCSLDLP;克隆5为HCSHTLCALHVM;克隆26为HCNSWLCPLITD也与该7个克隆有相似的序列,经比对核心序列为HCS及LCL。结论：首次用重组的TSV CP2蛋白从噬菌体随机12肽库中筛选到特异结合的肽序列,其共有结构特征为明确CP2与结合蛋白的相互作用位点提供支持。