硒结合蛋白2的表达及与FKBP38蛋白的相互作用

作     者：唐敏怡 莫广财 区家铭 王帅 吴晓丽 赵子建 李芳红 TANG Min-yi;MO Guang-cai;OU Jia-ming;WANG Shuai;WU Xiao-li;ZHAO Zi-jian;LI Fang-hong

作者机构：广东工业大学生物医药学院广东广州510006 南方医科大学顺德医院广东佛山528300 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2024年第24卷第17期

页      面：3205-3210页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：广东省重点领域研发计划项目(2019B020201015) 

主　　题：SELENBP2蛋白 重组pcDNA3.1-6xHIS-mSELENBP2质粒 FKBP38蛋白 免疫共沉淀 肝脏 

摘      要：目的:构建重组pcDNA3.1-6×HIS-mSELENBP2质粒并探讨SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白的相互作用。方法:首先以小鼠肝脏总RNA为模板,根据小鼠SELENBP2基因CDS序列设计的引物通过RT-PCR扩增SELENBP2蛋白编码序列,通过基因工程技术进行限制性核酸内切酶酶切、与pcDNA3.1-6×HIS载体连接并转化入JM108感受态大肠杆菌扩增,挑选阳性单克隆大肠杆菌并提取质粒后得到重组pcDNA3.1-6×HIS-mSELENBP2质粒。重组质粒经测序分析鉴定后,使用Lipofectamine 3000转染试剂转染至小鼠肝细胞--AML12细胞中培养30 h,采用Western blot法检测蛋白表达情况。使用AlphaFold-Multimer预测SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白相互作用的可能性及可能相互作用的结构域。最后,将重组质粒转染入过表达FKBP38蛋白的AML12细胞中,培养30 h后收集细胞蛋白样品,进行免疫共沉淀实验。结果:重组pcDNA3.1-6×HIS-mSELENBP2质粒测序结果显示插入的SELENBP2蛋白编码序列与GenBank中SELENBP2基因CDS序列相同,且转染重组质粒后,AML12细胞能有效表达SELENBP2-HIS融合蛋白。AlphaFold-Multimer结果显示SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白相互作用的可能性较高,且作用于FKBP38蛋白的TPR结构域。免疫沉淀实验结果显示,在AML12细胞中,SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白存在相互作用。结论:重组pcDNA3.1-6×HIS-mSELENBP2质粒构建成功并能在AML12细胞中正确表达,为进一步研究SENELBP2蛋白的功能奠定了基础。SELENBP2蛋白与FKBP38蛋白相互作用,为SELENBP2蛋白的研究进一步拓宽了思路,为深入研究SELENBP2蛋白在肝脏中的生物学功能提供了新方向。