3D培养的非小细胞肺癌多倍体巨细胞模型构建及其生物学特性的研究

作     者：孙佳 欧阳明玥 赵松 王丽丽 于卉影 Sun Jia;Ouyang Mingyue;Zhao Song;Wang Lili;Yu Huiying

作者机构：北部战区总医院基础医学实验室 沈阳 

出 版 物：《中国临床实用医学》 (China Clinical Practical Medicine)

年 卷 期：2024年第15卷第4期

页      面：46-52页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：辽宁省科学技术面上项目(2023-MS-037) 

主　　题：非小细胞肺癌 3D细胞培养 细胞球体 多倍体肿瘤巨细胞 

摘      要：目的探索三维(3D)人非小细胞肺癌多倍体巨细胞与二维(2D)模型的基因表达差异。方法人非小细胞肺癌细胞系NCI-H1299购自中国科学院上海细胞库。培养非小细胞肺癌NCl-H1299细胞球体, 加入多西紫杉醇(Doc)2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L诱导, 24 h后取出药物继续在新鲜培养基中培养72 h, 收集细胞, 另设未加药组作为对照组。Hochest染色观察细胞核的变化, 活-死细胞染色试剂盒观察细胞活性, 流式细胞术检测细胞凋亡, 流式细胞术检测细胞倍性, RT-PCR检测上皮间充质转化相关基因以及干性相关基因的表达差异。结果 3D培养的NCl-H1299细胞经Doc处理后细胞核增大, Calcein AM/PI染色显示Doc处理组细胞的死亡情况与加药浓度成正相关。5 μmol/L组细胞多倍体细胞比例(35.2±5.88)明显高于对照组(17.26±2.26), 3D培养的Doc处理组的早期凋亡[(9.06±1.24)%]低于对照组[(16.2±1.82)%], 晚期凋亡[(19.73±1.98)%]低于对照组[(26.13±1.36)%], 2D培养的Doc处理组早期凋亡[(23.96±1.82)%]高于对照组[(0.94±0.41)%], 晚期凋亡[(23.91±0.96)%]高于对照组(2.66±0.84)%], 差异均有统计学意义(P0.05)。3D多倍体肿瘤巨细胞模型上皮间质转化相关基因相较2D模型表达降低, 3D培养细胞干性相关基因经Doc处理后与在2D培养中趋势相反。结论本研究成功构建了非小细胞肺癌多倍体巨细胞3D培养模型, 并证明其在上皮间充质转化与干性相关基因表达与2D培养模型上有一定的差异, 该模型可更好地模拟体内肿瘤的发展变化。