周期蛋白D1正反义表达质粒的构建鉴定及其对哮喘大鼠气道平滑肌增殖的影响

作     者：乔礼芬 徐永健 刘先胜 谢俊刚 杜春玲 张建 倪望 陈士新 QIAO Li-fen;XU Yong-jian;LIU Xian-sheng;XIE Jun-gang;DU Chun-ling;ZHANG Jian;NI Wang;CHEN Shi-xin

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科湖北武汉430030 

出 版 物：《药学学报》 (Acta Pharmaceutica Sinica)

年 卷 期：2008年第43卷第3期

页      面：247-252页

核心收录：

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(3067092) 

主　　题：CyclinD1 表达载体 哮喘 气道平滑肌细胞 增殖 

摘      要：观察哮喘大鼠气道平滑肌周期蛋白D1的表达,并构建大鼠周期蛋白D1(CyclinD1)正反义表达质粒,转染支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC),探讨CyclinD1在哮喘大鼠ASMC增殖过程中的影响。大鼠雾化吸入卵清蛋白建立哮喘模型,免疫荧光检测CyclinD1的表达。以气道平滑肌条总RNA为模板,通过RT-PCR获取大鼠CyclinD1全长cDNA,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建CyclinD1正义表达质粒(pcDNA3.1-CyclinD1)和反义表达质粒(pcDNA3.1-asCyclinD1)。用脂质体介导的基因转染方法,将正反义重组体和空质粒(vector)分别转染哮喘大鼠和正常大鼠ASMC,用Western blotting方法鉴定CyclinD1基因的表达。采用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐(MTT)法、增殖细胞核抗原(PCNA)染色等方法观察构建质粒对哮喘大鼠ASMC增殖的影响。结果表明:(1)与对照组相比,哮喘组CyclinD1表达显著增高;(2)酶切鉴定和测序分析证实,试验成功构建了CyclinD1正反义表达质粒。与转染pcDNA3.1-CyclinD1组和vector组相比,转染pcDNA3.1-asCyclinD1组大鼠ASMC中CyclinD1表达水平下降(P0.01);(3)与vector组S+G2M期比例、吸收度(A)值、PCNA阳性表达率相比,转染pcDNA3.1-CyclinD1组增殖指标均明显增加(P0.01)。转染pcDNA3.1-asCyclinD1组增殖指标均明显下降(P0.01)。正常组大鼠转染质粒后各组间变化趋势与哮喘组一致。pcDNA3.1-CyclinD1可促进哮喘大鼠ASMC增殖,pcDNA3.1-asCyclinD1可抑制哮喘大鼠ASMC增殖,提示CyclinD1在哮喘ASMC增殖的信号转导中具有重要作用。