中成药中全蝎掺伪DNA分子鉴定

作     者：段宝丽 尤春雪 蒋超 DUAN Bao-li;YOU Chun-xue;JIANG Chao

作者机构：道地药材品质保障与资源持续利用全国重点实验室中国中医科学院中药资源中心北京100700 天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室天津300392 

出 版 物：《药物分析杂志》 (Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis)

年 卷 期：2024年第44卷第7期

页      面：1267-1275页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100704[医学-药物分析学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(83073972) 中国中医科学院中药资源中心自主选题研究项目(ZZXT202212) 

主　　题：中成药 全蝎 东亚钳蝎 细尖狼蝎 聚合酶链式反应 分子鉴定 TA克隆 系统发育树 

摘      要：目的:建立有效检出中成药中细尖狼蝎成分的方法,检测获得中成药中全蝎掺伪情况。方法:收集《中华人民共和国药典》收载的30种含全蝎成分的中成药,提取DNA,比对线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列差异,分别设计全蝎源性和细尖狼蝎源性特异性鉴别引物并对退火温度、循环次数、Taq酶以及DNA浓度进行优化,最终确定细尖狼蝎最适PCR鉴别条件包括退火温度52℃,循环数为36,Taq酶为2×PCR Mix,DNA模板为1μL,通过建立的中成药中细尖狼蝎成分检出方法对市售30种中成药中全蝎投料情况进行鉴定。结果:经凝胶电泳检测,30个全蝎成分中成药均检出正品东亚钳蝎特有DNA条带,18种中成药(60%)在100~250 bp可见单一细尖狼蝎特异性DNA条带,空白对照无条带。对检出细尖狼蝎特异性条带的PCR产物进行TA克隆后测序,序列均与细尖狼蝎参考序列具有很高的相似性(92%~98%),系统发育结果表明获得的序列均与细尖狼蝎为同一支系而与东亚钳蝎不同,因此在120 bp左右出现单一条带可鉴定为细尖狼蝎。结论:中成药中全蝎投料存在以细尖狼蝎掺伪全蝎投料的现象,需要加强监管。本研究建立的方法可以快速准确检出中成药中细尖狼蝎成分,有利于完善全蝎中成药的质量控制方法,为其临床应用提供保障。