Rab18调控禽偏肺病毒C型复制的研究

作     者：张正洲 王如嘉 亓宇翔 于瀚哲 孟闯 冯旭飞 ZHANG Zhengzhou;WANG Ruja;QI Yuxiang;YU Hanzhe;MENG Chuang;FENG Xufei

作者机构：扬州大学兽医学院(比较医学研究院)江苏扬州225009 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病重点实验室江苏扬州225009 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2024年第54卷第4期

页      面：433-440页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：江苏省高等学校基础科研(自然科学)面上项目(21KJB230009) 江苏省人兽共患病学重点实验室开放课题项目(R2106) 高等学校学科创新引智计划资助项目(D18007) 江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD) 

主　　题：禽偏肺病毒C型 Rab18 病毒复制 相互作用 表达水平 

摘      要：为探究Rab18调控禽偏肺病毒C型(aMPV/C)复制的分子机制,将aMPV/C感染A549细胞后进行激光共聚焦显微镜观察并用Image J软件分析共定位系数。结果显示,Rab18与aMPV/C N蛋白均在细胞质中表达并存在共定位,而未接毒组无明显的N蛋白荧光信号,接毒组共定位系数极显著高于未接毒组(P0.01)。将pCMV-Flag-Rab18、pCMV-Flag、siRab18以及siNC分别转染A549细胞,接种aMPV/C后收集细胞和细胞上清,分别用qPCR、Western-blot以及TCID50检测aMPV/C N基因的转录水平、N蛋白的表达水平以及病毒效价。结果显示,过表达Rab18后aMPV/C N基因的转录水平、N蛋白的表达水平以及病毒效价均极显著升高(P0.01),而干扰Rab18表达后N基因的转录水平、N蛋白的表达水平以及病毒效价均极显著降低(P0.01)。将pCMV-mcherry-Rab18分别与可融合表达GFP蛋白的aMPV/C各基因的质粒共转染A549细胞后进行激光共聚焦显微镜观察。结果显示,Rab18均可与aMPV/C各蛋白在细胞质中发生共定位。将pCMV-Flag-Rab18分别与可融合表达GFP蛋白的aMPV/C各基因的质粒共转染HKE293T细胞后进行免疫共沉淀试验。结果显示,Rab18与aMPV/C N、M2-1和L2共表达的IP样品中出现特异性条带,其他蛋白无特异性条带。这些结果表明,Rab18通过与N、M2-1和L2蛋白的互作影响aMPV/C的复制。研究结果为进一步深入解析Rab18调控aMPV/C复制的分子机理奠定了基础。