定点突变提高海洋氧化节杆菌KQ11右旋糖酐酶的催化活性
作者机构:合肥工业大学食品与生物工程学院
出 版 物:《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)
年 卷 期:2024年
核心收录:
学科分类:0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学]
摘 要:右旋糖酐酶是一种专一性水解α-1,6糖苷键的酶。本文针对海洋氧化节杆菌(Arthrobacter oxidans) KQ11来源的右旋糖酐酶,采用定点突变方法对参与“隧道状结合位点的氨基酸进行改造,并在此基础上对507位进行了饱和突变,获得了酶活和催化效率提高的突变酶A356G、S357W、W507Y、W507F。与野生株(wild type, WT)相比,突变体W507Y的比活力提高了2倍,kcat提高了3.62倍,Km下降了54%,催化效率kcat/Km提高了8.98倍。三维结构分析表明,相比于WT突变体W507Y与“隧道状结合位点的另一侧氨基酸间的距离缩短,更易产生氢键作用力,因此加快了底物的水解和产物排出,使得酶活和催化效率大幅提高。