抗IL-5纳米抗体筛选及活性检测

作     者：李诗洁 代维燕 王雪莲 刘畅 梁耀极 白仲虎 陈永奇 LI Shijie;DAI Weiyan;WANG Xuelian;LIU Chang;LIANG Yaoji;BAI Zhonghu;CHEN Yongqi

作者机构：江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室无锡214122 珠海瑞思普利医药科技有限公司珠海519040 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2024年第44卷第2期

页      面：59-68页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金：国家轻工技术与工程一流学科自主课题(LITE2018-24) 珠海市产学研合作及基础与应用基础研究项目(ZH2201700220000ZPWC) 2020年度珠海创新创业团队项目(2120004000325)资助项目 

主　　题：白介素-5 纳米抗体 阻断活性 噬菌体展示 哮喘 

摘      要：白介素-5(IL-5)是一种同源二聚体细胞因子,是嗜酸性粒细胞(eosinophilic,EOS)增殖、活化和成熟的重要调节因子。抗IL-5单克隆抗体能阻断IL-5与IL-5受体亚单位α(IL-5Rα)结合,已成功用于治疗嗜酸性粒细胞哮喘。目前上市的单克隆抗体药物需要反复注射给药,严重影响了患者的依从性,而且注射给药的全身暴露率高。为获得适合吸入给药的抗体,在羊驼天然库中通过3轮淘选,挑取单克隆通过Phage ELISA初筛,共获得461个阳性克隆,其中50个为序列独特的分子,最终选择30个分子进行重组表达纯化。通过ELISA结合、ELISA阻断、FACS阻断、TF-1增殖抑制等实验对候选抗体进行体外活性检测,成功获得一个具有阻断IL-5和IL-5Rα结合的纳米抗体AIL-A96-Fc。通过与人和猴IL-5的ELISA结合实验表明,该分子具有良好人猴交叉活性,而且在FACS阻断实验和ELISA阻断实验中,AIL-A96-Fc表现出良好的阻断效果。该开发方法不仅提供了一个靶向IL-5的候选纳米抗体AIL-A96-Fc,也为后续开发更多靶向IL-5的候选纳米抗体提供了指导意义。