肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠模型的构建

作     者：许雅萍 王语涵 陈婷婷 李南 高萍萍 李玲 王华 孙妩弋 Xu Yaping;Wang Yuhan;Chen Tingting;Li Nan;Gao Pingping;Li Ling;Wang Hua;Sun Wuyi

作者机构：安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院肿瘤科合肥230032 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2024年第59卷第3期

页      面：384-390页

学科分类：10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:82370632) 安徽省高校杰出青年科研项目(编号:2023AH020033) 安徽省转化医学研究院科研基金项目(编号:2022zhyx-C07) 安徽医科大学科研水平提升计划(编号:2021xkjT016) 安徽医科大学第三附属医院基础与临床合作研究提升计划培育专项(编号:2022sfy014) 

主　　题：肝细胞 Sirt3 基因敲除 Sirt3^(Δhep)小鼠 Cre-loxP 基因型鉴定 

摘      要：目的运用Cre-loxP技术构建肝细胞特异性沉默信息调节因子3(silence information regulator 3,Sirt3)基因敲除(Sirt3^(Δhep))小鼠,为研究肝细胞Sirt3基因在疾病中的生物学功能提供重要动物模型。方法将loxP标记的Sirt3 ^(flox/flox)小鼠与Alb-Cre纯合子(Alb-Cre^(+/+))小鼠进行交配,F1代Sirt3^(flox/-)/Alb-Cre^(+/-)小鼠再与Sirt3^(flox/flox)小鼠进行交配并鉴定,F2代基因型为Sirt3 ^(flox/flox)/Alb-Cre^(+/-)的小鼠即为本实验所构建的Sirt3^(Δhep)小鼠,Sirt3 ^(flox/flox)/Alb-Cre^(-/-)小鼠即为对照小鼠Sirt3 ^(flox/flox)小鼠。提取鼠尾DNA,通过PCR鉴定子代小鼠的基因型;免疫荧光双染观察Sirt3在小鼠肝细胞中的表达;提取Sirt3^(Δhep)小鼠原代肝细胞及心脏、脾脏、肾脏、肺组织蛋白,Western blot法验证Sirt3在小鼠肝细胞及其他组织中的表达水平;HE染色观察小鼠肝脏及心脏、脾脏、肺等组织结构。结果成功鉴定出Sirt3^(Δhep)小鼠;免疫荧光及Western blot结果显示,小鼠肝细胞中Sirt3蛋白表达水平低于对照组小鼠(P0.05);HE染色结果显示Sirt3^(Δhep)小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺、肾脏的组织学特征与对照组小鼠相比无明显变化。结论成功构建肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠,为进一步研究肝细胞Sirt3基因在相关疾病中的调控作用机制奠定了基础。