RhoA在氢减轻脂多糖致小鼠肺微血管内皮细胞屏障功能损伤中的作用

作     者：李媛 舒瑞辰 陈红光 尹毅青 Li Yuan;Shu Ruichen;Chen Hongguang;Yin Yiqing

作者机构：天津医科大学肿瘤医院麻醉科国家恶性肿瘤临床医学研究中心天津市恶性肿瘤临床医学研究中心天津市肿瘤防治重点实验室天津300060 天津医科大学总医院麻醉科天津市麻醉学研究所天津300052 

出 版 物：《中华麻醉学杂志》 (Chinese Journal of Anesthesiology)

年 卷 期：2024年第44卷第3期

页      面：334-338页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100217[医学-麻醉学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81801889,82101351) 天津市医学重点学科(专科)建设项目(TJYXZDXK-009A) 

主　　题：GTP结合蛋白质类 氢 脂多糖类 肺 微血管 内皮细胞 

摘      要：目的评价Ras同源家族成员A(RhoA)在氢减轻脂多糖(LPS)致小鼠肺微血管内皮细胞屏障功能损伤中的作用。方法小鼠肺微血管内皮细胞培养于含10%胎牛血清和1%青链双抗的DMEM/F12培养基中,传代至第4~6代的细胞用于实验,采用随机数字表法分为6组(n=36):对照组(A组)、富氢液组(B组)、LPS组(C组)、LPS+富氢液组(D组)、LPS+RhoA抑制剂C3酶组(E组)和LPS+富氢液+RhoA激活剂U-46619组(F组)。A组、C组和E组采用正常培养基培养,B组、D组和F组采用含饱和氢气培养基培养,C组、D组、E组和F组加入LPS,终浓度1μg/ml;E组于加入LPS前2 h加入C3酶,终浓度3μg/ml;F组于加入LPS前3 h加入U-46619,终浓度10 mg/ml。分别于LPS孵育后6、12和24 h时采用Western blot法检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和紧密连接蛋白(occludin)的表达;于LPS孵育后24 h时采用LDH法测定细胞LDH释放率,MTT法测定细胞活力,GST pull-down法测定RhoA活性。结果与A组比较,C组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达下调,孵育24 h时细胞活力降低,LDH释放率和RhoA活性升高(P0.05);与C组比较,D组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达上调,孵育24 h时细胞活力升高,LDH释放率和RhoA活性降低(P0.05);与C组比较,E组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达上调,孵育24 h时细胞活力升高,LDH释放率和RhoA活性降低(P0.05);与D组比较,F组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达下调,孵育24 h时细胞活力降低,LDH释放率和RhoA活性升高(P0.05)。结论RhoA参与了氢减轻LPS致小鼠肺微血管内皮细胞屏障功能损伤的过程。