猪微小RNA⁃15b前体突变对其生物学加工过程及前体脂肪细胞分化的影响

作     者：龙熙 孙文阳 潘红梅 张亮 陈四清 涂志 郭宗义 LONG Xi;SUN Wenyang;PAN Hongmei;ZHANG Liang;CHEN Siqing;TU Zhi;GUO Zongyi

作者机构：重庆市畜牧科学院重庆402460 

出 版 物：《动物营养学报》 (CHINESE JOURNAL OF ANIMAL NUTRITION)

年 卷 期：2024年第36卷第3期

页      面：1892-1903页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0836[工学-生物工程] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2021YFD1200303) 重庆市科研院所绩效激励引导专项(21530) 重庆荣昌猪产业集群项目(21313) 

主　　题：miR⁃15b 突变 前体脂肪细胞 成脂分化 猪 

摘      要：基于在猪微小RNA⁃15b(miR⁃15b)前体(pre⁃miR⁃15b)基因位点第58位碱基上发现了1个CT突变(+58CT),本试验旨在探究此突变对微小RNA(miRNA)生物学加工过程以及对猪前体脂肪细胞分化的影响。试验通过构建野生型(pmR⁃miR⁃15bW)和突变型(pmR⁃miR⁃15bM)miR⁃15b过表达载体,分别转染猪原代前体脂肪细胞进行miR⁃15b的过表达试验,然后利用实时荧光定量PCR对比2组细胞pre⁃miR⁃15b和miR⁃15b成熟体的表达量,在体外细胞水平明确+58CT对miR⁃15b生物学加工过程的影响;随后,诱导转染了不同基因型miR⁃15b过表达载体(pmR⁃miR⁃15bW和pmR⁃miR⁃15bM)的猪前体脂肪细胞成脂分化,利用实时荧光定量PCR对比2组细胞miR⁃15b靶基因叉头框蛋白O1(FOXO1)(可抑制脂肪细胞分化)以及成脂分化相关基因的相对表达量,同时结合油红O染色,明确此突变对猪前体脂肪细胞分化的影响。结果表明:2组细胞miR⁃15b初级转录本(pri⁃miR⁃15b)的表达量没有显著差异(P0.05),而突变组pre⁃miR⁃15b、miR⁃15b和微小RNA⁃16(miR⁃16)表达量极显著低于野生组(P0.05);油红O染色结果表明突变组细胞脂滴含量明显低于野生组。综上可知,+58CT阻碍了pri⁃miR⁃15b到pre⁃miR⁃15b的生物学加工过程,导致miR⁃15b成熟体表达量下降,其靶基因FOXO1相对表达量增高,从而抑制猪前体脂肪细胞分化。