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利用CRISPR/Cas9技术创建水稻OZ家族基因突变体

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分子植物育种 2024年

作者：李明鸿谭杰谢小艳郝培媛张毅王忠伟云南大学资源植物研究院重庆市农业科学院生物技术研究所

CRISPR/Cas9技术是近年来发展起来的一种简单而高效的基因编辑技术，已被广泛应用于植物基因功能研究和作物遗传改良。OZ蛋白属于锌指蛋白家族，在拟南芥和水稻基因组中各包括OZ1、OZ2、OZ3和OZ4四个家族成员，在拟南芥中OZ1和OZ2分别... 详细信息

CRISPR/Cas9技术是近年来发展起来的一种简单而高效的基因编辑技术，已被广泛应用于植物基因功能研究和作物遗传改良。OZ蛋白属于锌指蛋白家族，在拟南芥和水稻基因组中各包括OZ1、OZ2、OZ3和OZ4四个家族成员，在拟南芥中OZ1和OZ2分别被报道与RNA编辑和剪接相关，而在水稻中尚没有OZ蛋白家族的相关报道。为了探究OsOZ1、OsOZ2、OsOZ3、OsOZ4在水稻中的相关功能，本研究构建了4个水稻OZ基因的CRISPR/Cas9编辑载体，利用农杆菌介导法转化水稻‘中花11’，分别获得了20、17、13和19株T0阳性转基因植株。测序结果显示：T0阳性转基因植株发生了不同类型的突变，包括单碱基与多碱基的插入、删除和替换。本研究利用CRISPR/Cas9技术创制了水稻OZ基因家族突变体材料，为进一步研究水稻OZ蛋白家族的功能奠定了基础。

关键词：水稻锌指蛋白 OZ蛋白家族 CRISPR/Cas9

超高效合相色谱法快速测定食品复合包装袋中7种异氰酸酯类化合物的残留量及迁移量

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食品科学 2024年第11期45卷 285-292页

作者：邱月李根容余秋玲谭超兰陆嘉莉张清重庆市计量质量检测研究院重庆401123 重庆市九龙坡区疾病预防控制中心重庆400039

目的:建立一种超高效合相色谱(ultra-high performance convergence chromatography,UPC2)法快速检测食品复合包装袋中7种异氰酸酯类化合物的残留量和迁移量。方法:采用ACQUITY UPC2HSS C18SB色谱柱进行分离,流动相CO_(2)-甲醇进行梯度... 详细信息

目的:建立一种超高效合相色谱(ultra-high performance convergence chromatography,UPC2)法快速检测食品复合包装袋中7种异氰酸酯类化合物的残留量和迁移量。方法:采用ACQUITY UPC2HSS C18SB色谱柱进行分离,流动相CO_(2)-甲醇进行梯度洗脱,柱温40℃,系统背压13.10 MPa,二极管阵列检测器测定,外标法定量。结果:在最优条件下,7种异氰酸酯类化合物可在2 min内实现基线分离,检出限为1.0~3.0 μg/kg,定量限为5.0~10.0 μg/kg。在10、125 μg/kg和625 μg/kg 3 个加标水平下,7种异氰酸酯类化合物的加标回收率为85.1%~108.4%,相对标准偏差为0.7%~6.5%。采用本方法测定40批次市售食品复合包装袋样品,在7批次样品中发现有异氰酸酯类化合物残留,其中2,4-甲苯二异氰酸酯和2,6-二异丙基苯异氰酸酯的残留量相对较高,但这7批次阳性样品中异氰酸酯类化合物的迁移量均未检出。结论:本方法的建立可为后续食品复合包装袋中异氰酸酯类化合物的残留量及迁移量测定提供技术支持。

关键词：超高效合相色谱食品复合包装袋异氰酸酯类化合物残留量迁移量

猪微小RNA⁃15b前体突变对其生物学加工过程及前体脂肪细胞分化的影响

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动物营养学报 2024年第3期36卷 1892-1903页

作者：龙熙孙文阳潘红梅张亮陈四清涂志郭宗义重庆市畜牧科学院重庆402460

基于在猪微小RNA⁃15b(miR⁃15b)前体(pre⁃miR⁃15b)基因位点第58位碱基上发现了1个C>T突变(+58C>T),本试验旨在探究此突变对微小RNA(miRNA)生物学加工过程以及对猪前体脂肪细胞分化的影响。试验通过构建野生型(pmR⁃miR⁃15bW)和突变型(pmR⁃... 详细信息

基于在猪微小RNA⁃15b(miR⁃15b)前体(pre⁃miR⁃15b)基因位点第58位碱基上发现了1个C>T突变(+58C>T),本试验旨在探究此突变对微小RNA(miRNA)生物学加工过程以及对猪前体脂肪细胞分化的影响。试验通过构建野生型(pmR⁃miR⁃15bW)和突变型(pmR⁃miR⁃15bM)miR⁃15b过表达载体,分别转染猪原代前体脂肪细胞进行miR⁃15b的过表达试验,然后利用实时荧光定量PCR对比2组细胞pre⁃miR⁃15b和miR⁃15b成熟体的表达量,在体外细胞水平明确+58C>T对miR⁃15b生物学加工过程的影响;随后,诱导转染了不同基因型miR⁃15b过表达载体(pmR⁃miR⁃15bW和pmR⁃miR⁃15bM)的猪前体脂肪细胞成脂分化,利用实时荧光定量PCR对比2组细胞miR⁃15b靶基因叉头框蛋白O1(FOXO1)(可抑制脂肪细胞分化)以及成脂分化相关基因的相对表达量,同时结合油红O染色,明确此突变对猪前体脂肪细胞分化的影响。结果表明:2组细胞miR⁃15b初级转录本(pri⁃miR⁃15b)的表达量没有显著差异(P>0.05),而突变组pre⁃miR⁃15b、miR⁃15b和微小RNA⁃16(miR⁃16)表达量极显著低于野生组(P0.05);油红O染色结果表明突变组细胞脂滴含量明显低于野生组。综上可知,+58C>T阻碍了pri⁃miR⁃15b到pre⁃miR⁃15b的生物学加工过程,导致miR⁃15b成熟体表达量下降,其靶基因FOXO1相对表达量增高,从而抑制猪前体脂肪细胞分化。

关键词： miR⁃15b 突变前体脂肪细胞成脂分化猪

超高效合相色谱法快速测定食品接触材料中9种丙烯酸酯类化合物

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食品科学 2024年第1期45卷 225-231页

作者：邱月谭超兰刘小玉陆嘉莉余秋玲重庆市计量质量检测研究院重庆401123

采用超高效合相色谱(ultra performance convergence chromatography,UPC^(2))技术建立同时测定食品接触材料中9种丙烯酸酯类化合物的快速分析方法。样品经甲醇超声萃取,过有机滤膜,采用超临界二氧化碳-乙腈为流动相进行梯度洗脱,选用... 详细信息

采用超高效合相色谱(ultra performance convergence chromatography,UPC^(2))技术建立同时测定食品接触材料中9种丙烯酸酯类化合物的快速分析方法。样品经甲醇超声萃取,过有机滤膜,采用超临界二氧化碳-乙腈为流动相进行梯度洗脱,选用超高效色谱柱ACQUITY UPC^(2)HSS C_(18)SB,采用二极管阵列检测器在210 nm波长处进行检测。结果表明,在最优条件(柱温40℃、背压13.79MPa)下,9种丙烯酸酯类化合物在4min内可完成定性定量分析。甲基丙烯酸苯酯、甲基丙烯酸苯甲酯、乙二醇二甲基丙烯酸酯的线性范围为0.2~100mg/L,甲基丙烯酸的线性范围为0.3~100mg/L,丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸羟乙酯、丙烯酸羟乙酯的线性范围为0.4~100mg/L,甲基丙烯酸异丁酯、丙烯酸卞酯的线性范围为0.5~100mg/L,9种丙烯酸酯类化合物标准曲线的决定系数(R^(2))均高于0.9985。在高(30mg/kg)、中(6 mg/kg)、低(0.2、0.3、0.4、0.5 mg/kg)3个加标水平下,9种丙烯酸酯类化合物的加标回收率(n=6)为89.3%~109.7%,相对标准偏差为0.62%~3.86%,检出限(R_(SN)≥3)为0.05~0.15 mg/kg,定量限(R_(SN)≥10)为0.2~0.5mg/kg。将所建方法应用于30批次实际样品的检测,发现食品接触材料中存在丙烯酸酯类化合物残留风险。

关键词：丙烯酸酯类化合物超高效合相色谱塑料食品接触材料超声萃取

顶空/气相色谱-质谱联用法测定塑胶跑道面层中46种挥发性有机化合物

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分析测试学报 2024年第2期43卷 315-321页

作者：陆嘉莉杨倩邱月何小玲谢威余秋玲重庆市计量质量检测研究院重庆401123

建立了测定塑胶跑道面层中46种挥发性有机化合物(VOCs)的顶空/气相色谱-质谱联用(HS/GC-MS)法。样品剪碎后加入三乙酸甘油酯,顶空进样,目标物经DB-624UI毛细管色谱柱分离后,在电子轰击源(EI)下进行选择离子扫描(SIM)定性分析,外标法定... 详细信息

建立了测定塑胶跑道面层中46种挥发性有机化合物(VOCs)的顶空/气相色谱-质谱联用(HS/GC-MS)法。样品剪碎后加入三乙酸甘油酯,顶空进样,目标物经DB-624UI毛细管色谱柱分离后,在电子轰击源(EI)下进行选择离子扫描(SIM)定性分析,外标法定量。分别对色谱柱、升温程序、顶空参数和分散溶剂进行了优化。结果表明,在最优条件下,46种VOCs在各自质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))均大于0.995,方法检出限(LOD)和定量下限(LOQ)分别为0.05~0.60μg/g和0.10~1.20μg/g,在3个不同加标水平下的平均加标回收率为82.9%~114%,相对标准偏差(RSD,n=6)为1.1%~5.6%。该方法前处理简单、检出限低、准确度高,满足塑胶跑道面层中VOCs快速定性定量分析的要求。

关键词：挥发性有机化合物顶空气相色谱-质谱法塑胶跑道面层

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雷丸老伞个体发育特征及驯化栽培

菌物学报 2024年

作者：李娜卓维余中莲赵小红王晗卢圣鄂曹纬国重庆医科大学中医药学院重庆中医药学院中药学院重庆市药物种植研究所特色生物资源研究与利用川渝共建重点实验室

通过考察雷丸老伞Gerronema lapidescens（中药名：雷丸）子实体在不同栽培基质、光照强度及栽种季节下的生长情况，探究个体发育特征及驯化栽培的最适条件。观察表明，子实体形成过程中，雷丸老伞菌丝先交织为米粒状原基，经伸长、增... 详细信息

通过考察雷丸老伞Gerronema lapidescens（中药名：雷丸）子实体在不同栽培基质、光照强度及栽种季节下的生长情况，探究个体发育特征及驯化栽培的最适条件。观察表明，子实体形成过程中，雷丸老伞菌丝先交织为米粒状原基，经伸长、增粗后形成白色柱状子实体；随后柱状体顶端中央部分膨大分化为半球形黑色菌盖，随着菌盖颜色由深变浅，体积逐渐增大，产生担孢子，形成成熟子实体。菌核形成的过程中，菌丝先聚集成束形成菌索，菌索末端萌发出结构较为疏松的白色菌丝团，随着菌丝团密度的增加、体积的扩张以及表皮颜色的由浅入深，菌丝团逐渐形成成熟的菌核，并从菌索上脱落。栽培条件研究表明：在配方为木屑87.7%、玉米粉5.0%、麦麸5.0%、豆粕1.0%、石膏1.0%、MgSO40.1%、KH2PO40.2%的栽培基质中，菌丝日生长量最快，长势旺盛，为最佳栽培配方。环境温度较高的8月份是人工诱导子实体萌发的最适时间。在700 lx光照强度下，子实体形态最接近于野生状态。

关键词：雷丸老伞子实体驯化栽培发育特征

西南丘陵地区水田湿地磷污染的“源-汇”效应研究

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中国环境监测 2024年第4期40卷 213-219页

作者：王国泰蒋琼华何国军敖亮黄凌悦范围樊卫国中国环境科学研究院西南分院重庆市生态环境科学研究院重庆401147 彭水苗族土家族自治县生态环境监测站重庆409600 重庆市生态环境监测中心重庆401147

以重庆市大足区典型水田为研究对象,在冬水田-水稻种植模式下,探究水田湿地的面源污染“源-汇”效应及磷拦截效果。在施肥期(3—5月)、生长期(6—9月)及冬水田期(10—12月及次年1—2月)开展水田田面水和淋溶水磷素浓度原位观测,结果显示... 详细信息

以重庆市大足区典型水田为研究对象,在冬水田-水稻种植模式下,探究水田湿地的面源污染“源-汇”效应及磷拦截效果。在施肥期(3—5月)、生长期(6—9月)及冬水田期(10—12月及次年1—2月)开展水田田面水和淋溶水磷素浓度原位观测,结果显示:在施肥期,田面水和淋溶水中的磷素浓度大幅度升高,总磷平均浓度分别为0.20 mg/L和0.12 mg/L,易产生面源污染。在生长期,田面水中的磷素浓度保持较高水平,总磷平均浓度为0.18 mg/L。此时,田面水流失是面源污染的“源”。在生长期,淋溶水中的磷素浓度特别是溶解态总磷浓度呈下降趋势,总磷、溶解态总磷平均浓度分别为0.07、0.02 mg/L。此时,增加水田蓄水量,将田面水转化为淋溶水,能有效控制溶解态总磷的流失。在冬水田期,田面水和淋溶水中的磷素浓度较低,总磷平均浓度分别为0.09 mg/L和0.03 mg/L。此时,水田成为面源污染的“汇”。因此,在西南丘陵地区,推广开展冬水田蓄积工程建设能起到控制农业面源污染的作用。

关键词：水田磷面源污染控制雨量淋溶水田面水

潮湿环境砖石文物本体病害分析及保护技术研究进展

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重庆大学学报 2024年 1-18页

作者：刘远坚韩绍康张程仉文岗杨阳重庆市文物考古研究院建筑遗产研究所重庆大学土木工程学院

文中对潮湿环境砖石质文物的保护研究现状、基本特征、病害形成机理和保护方法等方面进行了总结及评述，潮湿环境砖石质文物从预防到修复，再到妥善保存，每一步都涉及到岩土工程、材料科学及微生物工程等多学科交叉，需进一步探索修复... 详细信息

文中对潮湿环境砖石质文物的保护研究现状、基本特征、病害形成机理和保护方法等方面进行了总结及评述，潮湿环境砖石质文物从预防到修复，再到妥善保存，每一步都涉及到岩土工程、材料科学及微生物工程等多学科交叉，需进一步探索修复材料的优选、检测技术的更新和修复手段的优化等，并对病害分析和保护措施流程规范化，为相关文物工作提供一定的参考。

关键词：砖石文物病害机理潮湿环境微生物加固文物保护

北山168窟顶板加固工程及施工过程跟踪监测分析

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重庆大学学报 2024年 61-85页

作者：刘珂源蒋思维冯太彬陈卉丽文加松陶志刚中国矿业大学(北京)隧道工程灾变防控与智能建养全国重点实验室中国矿业大学(北京)力学与土木工程学院大足石刻研究院北京国电水利电力工程有限公司

大足石刻北山168窟在1 000多年的卸荷作用下，洞窟内顶部裂隙纵横交错，存在着严重的结构稳定性问题。加固工程实施前洞窟顶板使用钢板、钢管等材料临时支撑以维护文物安全。但裂隙仍有延伸发展的趋势，且临时支撑钢板未做好防护措施，... 详细信息

大足石刻北山168窟在1 000多年的卸荷作用下，洞窟内顶部裂隙纵横交错，存在着严重的结构稳定性问题。加固工程实施前洞窟顶板使用钢板、钢管等材料临时支撑以维护文物安全。但裂隙仍有延伸发展的趋势，且临时支撑钢板未做好防护措施，表面锈蚀严重，168窟仍时刻面临失稳坍塌的危险，急需进行抢险加固治理保护。由于该工程属于文保类项目，要求在施工过程中不能够对本体造成较大扰动，所以需要对其整个施工过程进行跟踪监测。基于此，本文首先利用数值模拟的手段对在现有钢板支护下石窟的变形机理进行分析，根据其分析结果对监测点位进行布设，并根据监测数据对整个施工过程石窟的稳定性进行监测，进行工程治理评价，该监测结果可为类似大型平顶石窟破碎顶板的监测及保护工程提供参考。

关键词：平顶石窟监测数值模拟加固工程