乳杆菌源性外囊泡对LPS诱导小胶质细胞活化的影响及蛋白质组学分析

作     者：杨彦芳 徐反宁 倪新莉 Yang Yanfang;Xu Fanning;Ni Xinli

作者机构：宁夏医科大学总医院麻醉与围术期医学科银川750004 

出 版 物：《中华麻醉学杂志》 (Chinese Journal of Anesthesiology)

年 卷 期：2024年第44卷第2期

页      面：187-193页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100217[医学-麻醉学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金地区项目(82260238) 

主　　题：乳杆菌属 细胞外囊泡 脂多糖类 小神经胶质细胞 蛋白质组学 

摘      要：目的评价乳杆菌源性细胞外囊泡(Lac-EVs)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞活化的影响及蛋白质组学分析。方法取生长状态较好的小鼠BV2小胶质细胞,采用随机数字表法分为3组(n=12):对照组(C组)、LPS组(L组)和LPS+Lac-EVs组(L+E组)。C组正常培养;L组LPS(终浓度1 μg/ml)孵育24 h;L+E组于LPS处理后24 h加入Lac-EVs(终浓度2.5 μg/ml)孵育24 h。随后采用免疫荧光染色法检测CD86和CD206的表达。取L组和L+E组细胞沉淀,采用蛋白质组学方法筛选两组差异表达蛋白。对鉴定得到的差异表达蛋白进行生物信息学分析并采用RT-qPCR和Western blot法对载脂蛋白1(Apoa1)和G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(Git2)两个差异表达蛋白进行验证。结果与C组相比,L组CD86表达上调,CD206表达下调(P0.05);与L组相比,L+E组CD86表达下调,CD206表达上调(P0.05)。采用蛋白质组学法筛选出125个差异表达蛋白(FC=2.0,P0.05),其中66个蛋白表达上调,59个蛋白表达下调,其中Apoa1和Git2表达上调并且排名较前。GO分析结果表明,这些差异表达蛋白主要参与内皮细胞增殖、SDNA损伤检查以及脂蛋白运输等生物过程。KEGG分析结果表明,PPAR信号通路、内吞作用、代谢途径、MAPK信号通路等存在差异。Western blot法和RT-qPCR法测定上述差异蛋白的表达趋势与蛋白质组学结果一致。结论 Lac-EVs可抑制LPS诱导小胶质细胞向M1型极化,其机制可能与上调的差异表达蛋白Apoa1和Git2有关。