基于线粒体自噬探讨黄芪甲苷孵育的脂肪干细胞对糖尿病肾脏疾病大鼠的保护作用

作     者：高俊丽 李丽 刘琨 王巍巍 Gao Jun-li;Li Li;Liu Kun;Wang Wei-wei

作者机构：上海市第六人民医院金山分院肾内科上海201500 海军特色医学中心肾内科上海201203 

出 版 物：《临床肾脏病杂志》 (Journal Of Clinical Nephrology)

年 卷 期：2024年第24卷第1期

页      面：40-50页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：上海市卫生健康委员会科研课题(20214Y0144) 上海市金山区第七周期医学重点专科建设项目(JSZK2023H04) 上海市“十四五”中医特色专科建设项目(ZYTSZK2-13) 上海市名老中医学术经验研究工作室(SHGZS-202237) 海军医学中心卓优人才项目(21TPZY3202) 金山区卫生系统第五周期“优秀青年人才”培养计划(JSYQ202310) 金山区卫生和计划生育委员会课题(JSKJ-KTZY-2019-02) 金山区科学技术委员会课题(2019-3-9) 

主　　题：糖尿病肾脏疾病 脂肪干细胞 黄芪甲苷 线粒体自噬 

摘      要：目的观察尾静脉移植黄芪甲苷(astragaloside,Ast)孵育的人脂肪干细胞(human adipose derived stem cell,h ADSC)对糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)大鼠肾损伤的修复作用,探讨其可能机制。方法将21只SD大鼠按随机数字表法分为正常组(5只)、模型组(6只)、hADSC组(5只)及Ast-hADSC组(5只),后3组大鼠建立DKD模型,hADSC组及AsthADSC组尾静脉注射hADSC或Ast-hADSC悬液,每2周1次,共6次,模型组予等量生理盐水。检测肾功能、血脂、尿微量白蛋白/尿肌酐及尿蛋白定量,HE及Masson染色观察肾脏病理,激光共聚焦观察hADSC在肾脏定植情况,免疫组化及免疫蛋白印迹观察肾组织电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)、微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated-protein-lightchain-3,LC3)、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、自噬底物P62蛋白、磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PTEN induced putative kinase 1,Pink1)及E3泛素连接酶(E3 ubiquitin,Parkin)蛋白的表达,透射电镜观察线粒体及自噬小体情况。结果(1)与模型组比较,hADSC组及Ast-hADSC组血清总胆固醇[(2.65±0.04)mmol/L、(2.30±0.29)mmol/L比(3.31±0.91)mmol/L]、尿微量白蛋白/尿肌酐[(58.91±11.86)mg/g、(44±23.82)mg/g比(101.03±46.88)mg/g]及24 h尿蛋白定量[(321.18±88.71)mg、(136.35±66.01)mg比(408.67±113.95)mg]均下降(P0.05)。(3)肾脏病理:hADSC组及AsthADSC组大鼠肾损伤减轻,肾脏指数及肾小球截面积增大减轻(P0.05);Ast-hADSC组改善更显著。(4)激光共聚焦:hADSC组及Ast-hADSC组可见少量红色荧光表达。(5)免疫组化及免疫蛋白印迹:hADSC组及Ast-hADSC组LC3、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Pink1、Parkin蛋白的表达增加(P0.05),P62蛋白表达减少(P0.05);Ast-hADSCs组疗效更显著。(6)透射电镜:模型组线粒体肿胀变形、碎片较多,自噬小体的数量较少;hADSC组及Ast-hADSC组可见较多的自噬小体,肿胀变形的线粒体及线粒体碎片较少;Ast-hADSC组疗效更显著。结论尾静脉移植hADSC可恢复DKD大鼠肾组织中线粒体自噬,减轻肾损伤,经Ast孵育后疗效更显著。