金线莲ArLBD1基因克隆、亚细胞定位及表达分析

作     者：林江波 黄惠明 邹晖 李和平 戴艺民 LIN Jiangbo;HUANG Huiming;ZOU Hui;LI Heping;DAI Yimin

作者机构：福建省农业科学院亚热带农业研究所福建漳州363005 

出 版 物：《北方园艺》 (Northern Horticulture)

年 卷 期：2024年第1期

页      面：100-106页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：福建省属公益类科研院所基本科研专项资助项目(2021R1030001) 福建省农业科学院科技创新团队资助项目(CXTD2021001-2) 

主　　题：金线莲 ArLBD1 亚细胞定位 基因克隆 原核表达 

摘      要：以金线莲(Anoectochilus roxburghii)叶片的转录组数据为基础,采用RT-PCR技术克隆到了金线莲ArLBD1转录因子基因,采用生物信息学、原核表达、Western blot、亚细胞定位及qPCR等方法对该基因功能进行初步分析,以期为进一步研究其功能提供参考依据。结果表明:ArLBD1基因CDS长度864 bp,编码287个氨基酸。ArLBD1蛋白分子量为30.62 kD,理论等电点为6.25,不稳定系数55.55,属于不稳定蛋白。ArLBD1蛋白含有LOB superfamily保守结构域,第7~28氨基酸为C基序,第36~84氨基酸为GAS基序,第89~107氨基酸为类亮氨酸拉链基序,具有完整的类亮氨酸拉链基序,属于ClassⅠ。系统进化分析表明ArLBD1与拟南芥AtLBD36的亲缘关系最近,其次是AtLBD6。SDS-PAGE电泳及Western blot结果显示,ArLBD1基因在大肠杆菌中成功诱导表达。亚细胞定位分析发现ArLBD1蛋白定位在细胞核。qPCR分析结果表明,ArLBD1基因在金线莲叶、茎和根中都能检测到表达,在叶片表达量最高,其次是根,茎的表达量最低,推测ArLBD1基因主要在金线莲叶片发育中发挥功能。