‘圣心’杧果实TPS13基因表达分析及酶功能验证

作     者：王明珠 王亮 霍婷 黄小镂 丛汉卿 罗海燕 乔飞 姜成东 Wang Mingzhu;Wang Liang;Huo Ting;Huang Xiaolou;Cong Hanqing;Luo Haiyan;Qiao Fei;Jiang Chengdong

作者机构：海南大学园艺学院海口570208 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海口571101 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2024年第22卷第4期

页      面：1058-1065页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：海南省重大科技计划项目(ZDKJ2021012) 国家重点研发计划重点专项(2018YFD1000500) 国家自然科学基金地区基金项目(32160678)共同资助 

主　　题：‘圣心’杧 萜烯合酶 生物信息学分析 原核表达 

摘      要：为了探索‘圣心’杧品种中萜烯合酶基因功能,本研究以‘圣心’杧果肉为实验材料,利用同源克隆技术克隆到一个具有产生萜烯类物质功能的基因,并在原核表达体系中诱导纯化出该基因的蛋白,添加前体物质进行酶促反应后,通过气相色谱质谱联用(GC-MS)上机检测该基因的产物。结果表明,在‘圣心’杧果肉中进行扩增得到一个产生萜烯类物质的基因,命名为TPS13,该基因长度在1692 bp,编码563个氨基酸,通过在线网站预测TPS13属于亲水性,不稳定蛋白,理论等电点(pI)值为5.51,说明该蛋白为酸性蛋白。通过对其结构域预测分析:TPS13蛋白的第52~540位氨基酸区间内包含一个天冬氨酸基序的cd00684结构域,属于Ⅰ类萜烯环化酶超家族。酶活性鉴定表明,该基因无法与底物GPP、FPP和GGPP生成产物,具有催化单萜类底物(NPP)生成产物柠檬烯以及α-松油醇。本试验结果为进一步研究杧果萜类物质提供参考依据。