CHO细胞表达重组猪干扰素-γ及其抗病毒活性

作     者：王凌云 郝荣增 杨洋 李亚军 卢炳州 毛玉涵 张越 龚真莉 刘艳红 齐萌 茹毅 郑海学 WANG Lingyun;HAO Rongzeng;YANG Yang;LI Yajun;LU Bingzhou;MAO Yuhan;ZHANG Yue;GONG Zhenli;LIU Yanhong;QI Meng;RU Yi;ZHENG Haixue

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2023年第39卷第12期

页      面：4784-4795页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：甘肃省科技重大专项计划(21ZD3NA001-1) 中国农业科学院所级重点任务(CAAS-ASTIP-JBGS-20210401) 中国农业科学院兰州兽医研究所所级基本科研业务费(1610312021013,1610312022009) 

主　　题：猪干扰素-γ 塞内卡病毒A 中国仓鼠卵巢(CHO)细胞 蛋白表达与纯化 抗病毒活性 

摘      要：为利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovarian,CHO)细胞表达系统制备重组猪干扰素-γ(recombinant porcine interferon gamma,rPoIFN-γ),并分析其体外抗病毒活性,本研究首先构建rPoIFN-γ真核表达质粒pc DNA3.1-PoIFN-γ,转染悬浮培养的CHO细胞,进行上清分泌表达,利用亲和层析纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定;通过CCK-8实验分析rPoIFN-γ对细胞的毒性,用VSV/PK-15系统检测其抗病毒活性效价;最后分析rPoIFN-γ对塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的抗病毒活性及其对细胞内干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)和细胞因子的诱导作用。结果显示,本研究利用CHO悬浮细胞表达系统成功制备了纯化的rPoIFN-γ,该rPoIFN-γ对细胞无毒性,VSV/PK-15系统检测其活性效价为5.59×10^(7) U/mg;此外,rPoIFN-γ可诱导细胞内多种ISGs和细胞因子的表达,并显著抑制SVA的复制。总之,本研究成功利用CHO表达系统制备了高活性的rPoIFN-γ,并在体外完成其对SVA的抗病毒作用分析,为rPoIFN-γ的功能及抗病毒制剂的研究提供了实验材料和基础。