补中益气汤通过Nrf2/ROS通路调控线粒体途径细胞凋亡改善A549/DDP细胞顺铂耐药的分子机制

作     者：牟琪瑞 李贺 刘玥彤 高原 刘春英 MU Qirui;LI He;LIU Yuetong;GAO Yuan;LIU Chunying

作者机构：辽宁中医药大学中西医结合学院沈阳110847 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2024年第30卷第1期

页      面：95-102页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 100501[医学-中医基础理论] 100502[医学-中医临床基础] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81973735) 辽宁省教育厅科学研究经费面上项目(LJKZ0901) 

主　　题：补中益气汤 非小细胞肺癌 核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS) 线粒体途径细胞凋亡 顺铂耐药 

摘      要：目的:探讨补中益气汤含药血清通过核因子E_2相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS)通路调控线粒体途径细胞凋亡改善人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞(A549/DDP)顺铂耐药的机制。方法:制备补中益气汤含药血清及培养A549/DDP细胞,并进行随机分组为空白组(10%空白血清)、顺铂组(10%空白血清+20 mg·L^(-1)顺铂)、补中益气汤组(10%含药血清+20 mg·L^(-1)顺铂)、ML385组(10%空白血清+5μmol·L^(-1)ML385+20 mg·L^(-1)顺铂)、补中益气汤联合ML385组(10%含药血清+5μmol·L^(-1)ML385+20 mg·L^(-1)顺铂)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)组(10%空白血清+5μmol·L^(-1)TBHQ+20 mg·L^(-1)顺铂)、补中益气汤联合TBHQ组(10%含药血清+5μmol·L^(-1)TBHQ+20 mg·L^(-1)顺铂),应用细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测各组顺铂半数抑制浓度(IC_(50))值并计算耐药指数(RI),流式细胞术检测各组细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针法检测各组活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组Nrf2、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、细胞色素C(CytC)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果:与顺铂组比较,补中益气汤组、ML385组、补中益气汤联合ML385组A549/DDP细胞顺铂的IC_(50)及RI均明显降低(P0.05);与空白组比较,顺铂组、补中益气汤组、ML385组、补中益气汤联合ML385组A549/DDP细胞的凋亡率均明显升高(P0.05);与空白组比较,顺铂组细胞内Nrf2表达明显升高(P0.05),与顺铂组比较,补中益气汤组、ML385组、补中益气汤联合ML385组Nrf2表达均明显降低(P0.05),上述各组ROS表达量均明显升高(P0.05),cleaved Caspase-3、CytC蛋白表达均升高、Bcl-2蛋白表达明显降低(P0.05),其中以补中益气汤联合ML385组效果最为明显。与顺铂组比较,TBHQ组顺铂IC_(50)值及RI明显升高(P0.05),A549/DDP细胞凋亡率明显降低(P0.05),Nrf2蛋白表达明显升高(P0.05),ROS表达下降(P0.05),cleaved Caspase-3、CytC蛋白表达降低、Bcl-2蛋白表达明显升高(P0.05)。在补中益气汤联合TBHQ之后,与TBHQ组比较,A549/DDP细胞顺铂的IC_(50)值及RI再次明显降低(P0.05),凋亡率再次明显升高(P0.05),Nrf2蛋白表达再次下降(P0.05),ROS表达再次明显升高(P0.05),cleaved Caspase-3、CytC蛋白表达再次上调、Bcl-2蛋白表达再次下调(P0.05)。结论:补中益气汤通过抑制Nrf2/ROS通路诱导线粒体途径细胞凋亡以改善A549/DDP细胞的顺铂耐药性。