苓桂气化方干预射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的物质基础及分子机制

作     者：石玉姣 杨琳 刘春秋 杨晨光 乔文博 刘永成 刘思雨 刘剑刚 董国菊 SHI Yujiao;YANG Lin;LIU Chunqiu;YANG Chenguang;QIAO Wenbo;LIU Yongcheng;LIU Siyu;LIU Jiangang;DONG Guoju

作者机构：中国中医科学院西苑医院北京100091 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2023年第29卷第20期

页      面：20-29页

核心收录：

学科分类：100504[医学-方剂学] 1005[医学-中医学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100501[医学-中医基础理论] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(82074423) 中国中医科学院科技创新重大攻关项目(CI2021A00903)。 

主　　题：射血分数保留的心力衰竭 苓桂气化方 分子对接 液相色谱-质谱法 心肌纤维化 

摘      要：目的:探讨苓桂气化方干预射血分数保留心力衰竭(HFpEF)心肌纤维化的物质基础及分子机制。方法:采用液相色谱-质谱联用法(LC-MS)定性分析苓桂气化方的活性成分。使用AutoDock软件进行苓桂气化方的活性成分与目标蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)之间的分子对接。进行体内实验:40只4周龄自发性高血压大鼠(SHR)平均分为HFpEF组、诺欣妥组(0.018 g·kg^(-1))、苓桂低剂量组(3.87 g·kg^(-1))及苓桂高剂量组(7.74 g·kg^(-1)),给予高脂、高盐及高糖饮食16周和腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只WKY大鼠和10只SHR大鼠作为空白组。造模成功后,WKY、SHR及HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(LV)前壁厚度(LVAWd)、LV后壁厚度(LVPWd)、LV舒张末内径(LVIDd)、LV射血分数(LVEF)、等容舒张时间(IVRT)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)及LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e’),并计算E/e’;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清心房钠尿肽(ANP)、B型利钠肽(BNP)及半乳糖凝集素-3(Gal-3);病理切片进行马松染色以观察心肌纤维化,并计算胶原体积分数(CVF)及血管周围纤维化比率(PFR);实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LV心肌α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、MMP-9、TIMP-1的mRNA及蛋白表达。结果:LC-MS鉴定出苓桂气化方含有13种活性成分。分子对接提示13种化合物能稳固地与5个靶蛋白结合。体内实验证实:与空白组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、IVRT、E/e’、ANP、BNP、Gal-3、CVF及PFR显著升高,LV心肌α-SMA、ColⅠ、ColⅢmRNA表达及蛋白表达显著上调,MMP-9/TIMP-1mRNA及蛋白比例明显下调(P0.05,P0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方可能呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、IVRT、E/e’、ANP、BNP、Gal-3、CVF及PFR,下调心肌α-SMA、ColⅠ、ColⅢmRNA表达及α-SMA和ColⅠ蛋白表达,并上调MMP-9/TIMP-1的mRNA及蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:苓桂气化方含有多种活性成分,可能抑制HFpEF大鼠的心肌纤维化,进一步减轻LV肥厚、扩大及舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。