基于AMPK/mTOR通路介导的自噬探讨温补固肾方对糖尿病肾纤维化的影响

作     者：禹静 刘续春 李振华 YU Jing;LIU Xuchun;LI Zhenhua

作者机构：黄淮学院直属附属驻马店市中心医院河南驻马店463000 郑州市中心医院河南郑州450001 

出 版 物：《中医药信息》 (Information on Traditional Chinese Medicine)

年 卷 期：2023年第40卷第10期

页      面：14-21,26页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：河南省中医药科学研究专项课题项目(2019zY1018) 

主　　题：糖尿病肾病 温补固肾方 纤维化 自噬 AMPK/mTOR通路 

摘      要：目的:探究温补固肾方调控AMPK/mTOR通路介导的自噬途径对糖尿病肾纤维化的保护机制。方法:雄性SPF级SD大鼠100只,除对照组20只外,均采用腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)构建糖尿病肾病模型。其中60只大鼠随机分为对照组、糖尿病肾病组、达格列净组(1.0 mg/kg)、温补固肾方低、中、高剂量组(0.92、1.84、3.68 g/kg),每组各10只。给予相应药物灌胃12周后,检测各组大鼠肾功能生化指标;HE和PAS染色观察肾组织病理形态变化;免疫组化法检测肾组织α-SMA,E-Cadherin表达;电镜观察自噬小体形成;Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-AMPK/AMPK和p-mTOR/mTOR表达。剩余40只大鼠随机分为对照组、糖尿病肾病组、温补固肾方高剂量组(3.68 g/kg)、温补固肾方高剂量组+AMPK抑制剂组(20 mg/kg),每组各10只。给予相应药物12周后,检测大鼠肾功能生化指标,电镜观察肾组织病理形态,Masson染色观察肾纤维化程度,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及AMPK/mTOR通路蛋白表达。结果:与对照组比较,糖尿病肾病组大鼠肾功能损伤严重,并伴有明显的病理损伤,肾组织α-SMA表达增加,E-Cadherin表达降低(P0.01),自噬小体数量减少(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及p-AMPK/AMPK比值降低,p-mTOR/mTOR比值增加(P0.01)。与糖尿病肾病组比较,温补固肾方各剂量组大鼠肾功能及组织病理性损伤均有不同程度改善,α-SMA表达降低,E-Cadherin表达增加(P0.05,P0.01),自噬小体数量增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及p-AMPK/AMPK比值增加,p-mTOR/mTOR比值降低(P0.05,P0.01)。与温补固肾方高剂量组比较,AMPK抑制剂能够逆转温补固肾方糖尿病肾病大鼠的治疗作用,抑制上述相关指标变化。结论:温补固肾方能够激活AMPK/mTOR通路介导的自噬改善糖尿病大鼠肾纤维化。