血根碱基于PI3K/AKT通路抑制结肠癌细胞增殖和迁移的机制研究

作     者：王密 翁春燕 WANG Mi;WENG Chun-Yan

作者机构：浙江中医药大学附属温州市中医院急诊科温州325000 浙江中医药大学第一临床医学院消化内科杭州310053 

出 版 物：《浙江中西医结合杂志》 (Zhejiang Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine)

年 卷 期：2023年第33卷第9期

页      面：803-807页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主　　题：血根碱 结肠肿瘤 增殖 迁移 PI3K/AKT 

摘      要：目的研究血根碱在结肠癌细胞增殖和迁移中的作用及其机制。方法使用不同剂量(2、4、8μmol/L)血根碱对结肠癌细胞系(HCT-8、SW-620)进行处理,利用光学显微镜观察结肠癌细胞形态变化;细胞计数试剂CCK-8及细胞克隆试验观察血根碱对结肠癌细胞生长的影响;细胞划痕实验测定血根碱对结肠癌细胞迁移的影响;蛋白质印迹法测定相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-AKT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达。建立HCT-8皮下瘤体模型,分别采用生理盐水和10 mg/kg的血根碱液进行腹腔内灌注,以探讨其对结肠癌的抑制作用。结果CCK-8实验表明,血根碱对结肠癌细胞有明显杀伤作用[HCT-8和SW-620的IC_(50)分别是(3.40±0.03)μmol/L和(5.32±0.12)μmol/L],而对正常结肠黏膜细胞具有较小的杀伤作用[IC_(50)为(14.98±1.34)μmol/L]。不同浓度(0、2、4、8μmol/L)的血根碱以剂量依赖性抑制结肠癌细胞的克隆形成。细胞划痕试验表明,血根碱会显著抑制大肠癌细胞HCT-8迁移[(24.55±5.45)%、(15.50±3.38)%、(3.36±2.37)%比(59.43±5.05)%,P0.05]。蛋白质印迹法表明,与对照组比较,上述浓度下的血根碱能显著降低大肠癌组织中N-cad、PI3K、p-AKT和mTOR的表达[N-cad:(0.80±0.12)、(0.51±0.08)、(0.29±0.03)比(1.00±0.08);PI3K:(0.88±0.04)、(0.81±0.03)、(0.67±0.06)比(1.00±0.05);p-AKT:(0.77±0.06)、(0.70±0.03)、(0.47±0.03)比(1.00±0.08);mTOR:(0.79±0.13)、(0.55±0.11)、(0.34±0.03)比(1.00±0.09);P0.05],增加E-cad蛋白表达[(0.60±0.02)、(0.86±0.07)、(1.00±0.03)比(0.44±0.11),P0.05]。体内试验表明,与对照组比较,血根碱液对皮下肿瘤的生长有显著的抑制作用[肿瘤体积:(367.48±30.17)mm^(3)比(862.28±133.90)mm^(3);肿瘤质量:(0.63±0.11)g比(1.01±0.21)g;P0.05]。结论血根碱可能抑制大肠癌细胞的增殖和迁移,具有一定的体内外抑瘤活性,并且能调节结肠癌细胞PI3K/AKT信号通路。