4种猪腹泻病毒恒温隔绝式荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

作     者：侯闻闻 余良政 樊毛迪 朱振邦 林成贤 陈昌海 李向东 HOU Wenwen;YU Liangzheng;FAN Maodi;ZHU Zhenbang;LIN Chengxian;CHEN Changhai;LI iangdong

作者机构：扬州大学兽医学院江苏扬州1225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 金瑞鸿捷(厦门)生物科技有限公司福建厦门361028 江苏省动物疫病预防控制中心江苏南京210036 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第55卷第9期

页      面：83-88页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：江苏省农业科技自主创新资金项目[CX(21)2014] 江苏现代农业产业体系建设项目(JATS361) 

主　　题：猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 猪德尔塔冠状病毒 恒温隔绝式荧光RT-PCR 

摘      要：为鉴别猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)这4种猪主要腹泻病毒,本研究分别针对PEDV M基因、TGEV M基因、PoRV NSP5基因、PDCoV M基因设计特异性引物和探针,经过方阵法优化恒温隔绝式荧光RT-PCR(iiRT-PCR)反应条件,建立了检测这4种猪腹泻病毒iiRT-PCR方法。用建立的iiRT-PCR方法分别检测PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、日本脑炎病毒(JEV),并对iiRT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,结果显示该方法特异性强,对PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV的检测下限分别为10^(2)、10^(2)、10^(3)、10^(3)TCID_(50)/mL,并具有良好的组内和组间重复性;而荧光定量PCR方法的检测下限分别为10^(1)、10^(2)、10^(2)、10^(2)TCID_(50)/mL,敏感性略高于iiRT-PCR。2种方法对22份临床样品的检测结果符合率为100%,PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV阳性率分别为40.91%、9.09%、45.45%、9.09%,其中PEDV与PoRV混合感染率为18.18%,PDCoV与PoRV混合感染率为4.55%。本研究建立的iiRT-PCR为临床现场检测4种猪腹泻病毒提供了一种简便快速的方法。