程序性死亡受体1及其配体在急性髓系白血病患者中的表达及其体外对程序性死亡受体1阳性自然杀伤细胞抗肿瘤作用的影响

作     者：程诚 李冬贝 米瑞华 陈琳 曹长松 魏旭东 Cheng Cheng;Li Dongbei;Mi Ruihua;Chen Lin;Cao Changsong;Wei Xudong

作者机构：郑州大学附属肿瘤医院血液科郑州450008 

出 版 物：《白血病．淋巴瘤》 (Journal of Leukemia & Lymphoma)

年 卷 期：2023年第32卷第7期

页      面：385-393页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：河南省医学科技攻关计划省部共建(青年)项目(SBGJ202003012) 河南省医学科技攻关计划联合共建项目(LHGJ20190647) 

主　　题：白血病,髓样,急性 杀伤细胞,天然 程序性死亡受体1 程序性死亡受体配体1 细胞因子类 NKG2D 

摘      要：目的探讨程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)通路在急性髓系白血病(AML)患者中的表达及其与临床特征、预后的关系,并体外验证其对PD-1阳性自然杀伤(NK)细胞抗AML细胞的影响。方法前瞻性收集2019年7月至2020年12月于郑州大学附属肿瘤医院确诊的65例AML患者骨髓标本及32例AML患者外周血,同时留取24名健康人外周血作为健康对照。流式细胞术检测骨髓肿瘤细胞PD-L1、外周血NK细胞PD-1表达水平,分析骨髓肿瘤细胞PD-L1与NK细胞PD-1表达与患者临床病理特征及疗效、预后的关系。流式细胞术检测AML细胞株THP-1(靶细胞)的PD-L1、NK细胞株NKL(效应细胞)的PD-1表达水平。经及未经PD-L1抑制剂梣酮(25 μmol/L)处理的THP-1细胞分别为实验组和对照组,分别与NKL细胞按不同效靶比共培养。流式细胞术检测THP-1细胞凋亡情况和NKL细胞NKG2D的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况并计算增殖抑制率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养体系上清中干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果 AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于健康对照组[38.5%(25/65)比8.3%(2/24),P=0.029],AML患者外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例高于健康对照组[40.6%(13/32)比12.5%(3/24),P=0.035]。骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性和阴性患者间及外周血NK细胞PD-1阳性和阴性患者间性别、年龄、就诊时血象、原始细胞比例、危险度分层、染色体核型、有无基因突变(除外NPM1基因)、融合基因及法、美、英协作组(FAB)分型的构成差异均无统计学意义(均P0.05)。复发难治患者中骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于初治患者[58.8%(10/17)比31.2%(15/48),P=0.045],复发难治患者与初治患者间外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例的差异无统计学意义[38.5%(5/13)比42.1%(8/19),P=0.837]。PD-L1阳性与阴性患者完全缓解(CR)率差异无统计学意义[69.6%(16/23)比74.3%(26/35),P0.05];PD-1阳性与阴性患者CR率差异无统计学意义[66.7%(8/12)比70.6%(12/17),P0.05]。PD-L1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[12.5%(2/16)比19.2%(5/26),P0.05];PD-1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[25.0%(2/8)比16.7%(2/12),P0.05]。流式细胞术检测示,NKL细胞PD-1阳性率为(67±6)%,THP-1细胞PD-L1阳性率为(85±5)%。与NKL细胞共培养后,与对照组相比,实验组THP-1细胞凋亡率和增殖抑制率均明显增高,NKL细胞表面NKG2D表达升高,共培养上清中IFN-γ、TNF-α水平升高。结论 AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平较高,外周血NK细胞PD-1表达水平亦较高,复发难治AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平高于初治患者。体外抑制THP-1细胞PD-L1表达可增强NKL细胞肿瘤杀伤活性,其机制可能是抑制THP-1细胞PD-L1表达后上调了NKL细胞活化型受体NKG2D的表达以及促进了IFN-γ和TNF-α的分泌。