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程序性死亡受体1及其配体在急性髓系白血病患者中的表达及其体外对程序性死亡受体1阳性自然杀伤细胞抗肿瘤作用的影响

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白血病．淋巴瘤 2023年第7期32卷 385-393页

作者：程诚李冬贝米瑞华陈琳曹长松魏旭东郑州大学附属肿瘤医院血液科郑州450008

目的探讨程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)通路在急性髓系白血病(AML)患者中的表达及其与临床特征、预后的关系,并体外验证其对PD-1阳性自然杀伤(NK)细胞抗AML细胞的影响。方法前瞻性收集2019年7月至2020年12月于郑州... 详细信息

目的探讨程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)通路在急性髓系白血病(AML)患者中的表达及其与临床特征、预后的关系,并体外验证其对PD-1阳性自然杀伤(NK)细胞抗AML细胞的影响。方法前瞻性收集2019年7月至2020年12月于郑州大学附属肿瘤医院确诊的65例AML患者骨髓标本及32例AML患者外周血,同时留取24名健康人外周血作为健康对照。流式细胞术检测骨髓肿瘤细胞PD-L1、外周血NK细胞PD-1表达水平,分析骨髓肿瘤细胞PD-L1与NK细胞PD-1表达与患者临床病理特征及疗效、预后的关系。流式细胞术检测AML细胞株THP-1(靶细胞)的PD-L1、NK细胞株NKL(效应细胞)的PD-1表达水平。经及未经PD-L1抑制剂梣酮(25 μmol/L)处理的THP-1细胞分别为实验组和对照组,分别与NKL细胞按不同效靶比共培养。流式细胞术检测THP-1细胞凋亡情况和NKL细胞NKG2D的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况并计算增殖抑制率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养体系上清中干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果 AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于健康对照组[38.5%(25/65)比8.3%(2/24),P=0.029],AML患者外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例高于健康对照组[40.6%(13/32)比12.5%(3/24),P=0.035]。骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性和阴性患者间及外周血NK细胞PD-1阳性和阴性患者间性别、年龄、就诊时血象、原始细胞比例、危险度分层、染色体核型、有无基因突变(除外NPM1基因)、融合基因及法、美、英协作组(FAB)分型的构成差异均无统计学意义(均P>0.05)。复发难治患者中骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于初治患者[58.8%(10/17)比31.2%(15/48),P=0.045],复发难治患者与初治患者间外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例的差异无统计学意义[38.5%(5/13)比42.1%(8/19),P=0.837]。PD-L1阳性与阴性患者完全缓解(CR)率差异无统计学意义[69.6%(16/23)比74.3%(26/35),P>0.05];PD-1阳性与阴性患者CR率差异无统计学意义[66.7%(8/12)比70.6%(12/17),P>0.05]。PD-L1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[12.5%(2/16)比19.2%(5/26),P>0.05];PD-1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[25.0%(2/8)比16.7%(2/12),P>0.05]。流式细胞术检测示,NKL细胞PD-1阳性率为(67±6)%,THP-1细胞PD-L1阳性率为(85±5)%。与NKL细胞共培养后,与对照组相比,实验组THP-1细胞凋亡率和增殖抑制率均明显增高,NKL细胞表面NKG2D表达升高,共培养上清中IFN-γ、TNF-α水平升高。结论 AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平较高,外周血NK细胞PD-1表达水平亦较高,复发难治AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平高于初治患者。体外抑制THP-1细胞PD-L1表达可增强NKL细胞肿瘤杀伤活性,其机制可能是抑制THP-1细胞PD-L1表达后上调了NKL细胞活化型受体NKG2D的表达以及促进了IFN-γ和TNF-α的分泌。

关键词：白血病,髓样,急性杀伤细胞,天然程序性死亡受体1 程序性死亡受体配体1 细胞因子类 NKG2D

急性髓系白血病合并同时性多原发实体瘤12例临床特征分析

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中华医学杂志 2020年第42期100卷 3323-3327页

作者：米瑞华党慧兵陈玲韩阳利王敏芳张龑莉陈琳李冬贝魏旭东河南省肿瘤医院郑州大学附属肿瘤医院血液科郑州450008 南阳医专第一附属医院血液科南阳473000 平顶山市新华区医院血液科平顶山467000 平顶山市第一人民医院血液科平顶山467000

目的探讨急性髓系白血病(AML)合并同时性多原发癌(SMPC)的临床特征。方法回顾性分析2014年3月至2019年7月在郑州大学附属肿瘤医院、南阳医专第一附属医院、平顶山市新华区医院、平顶山市第一人民院住院的12例AML合并SMPC的患者资料,并... 详细信息

目的探讨急性髓系白血病(AML)合并同时性多原发癌(SMPC)的临床特征。方法回顾性分析2014年3月至2019年7月在郑州大学附属肿瘤医院、南阳医专第一附属医院、平顶山市新华区医院、平顶山市第一人民院住院的12例AML合并SMPC的患者资料,并结合文献对其临床特征、治疗及转归进行总结。结果12例患者中,男6例,女6例,年龄[M(范围)]58岁(39~70岁);AML分类:12例AML患者中,按法美英分型系统(FAB)分型,M01例,M11例,M2a 5例,M2b 1例,M32例,M52例;按美国国立综合癌症网络(NCCN)预后分层,低危组1例,中危组4例,高危组7例。实体肿瘤分类:肺癌3例,乳腺癌1例,胃癌2例,食管癌3例,直肠神经内分泌肿瘤1例,侵袭性葡萄胎1例,乙状结肠癌1例。诊断两种原发恶性肿瘤的间隔时间中位数为4.0(2.6~5.6)个月。AML预后基因检测结果:共检出ASXL1、JAK2、TET2、U2AF1、ABCB1、FLT3-ITD、RUNX1、SETBPIT、TET2(SNP)、P53、IKZF1、IDH212种基因异常;实体瘤相关基因检测结果:共检出Her-2、EGFR、K-RAS、MSI 4种基因异常。12例患者中1例失访,2例治疗中,3例治疗结束,病情稳定,6例死亡;12例患者的中位总生存期为12.5(3.8~48.0)个月。结论AML和实体肿瘤同时发生是否有一定的相关性尚无定论,二者同时发生虽然少见但并不罕见,应同时对两种肿瘤进行积极治疗。

关键词：白血病,髓样,急性实体瘤多原发癌同时性生存

转染Aire的DC2.4细胞对CD4+T细胞亚群的影响及其机制的研究

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转染Aire的DC2.4细胞对CD4+T细胞亚群的影响及其机制的研究

AOA后置短时低氧曝气实现短程硝化反硝化除磷

第九届全国免疫学学术大会

作者：李海军李冬贝牛坤伟杨巍李一吉林大学基础医学院免疫学系

研究背景:自身免疫调节因子(Autoimmune regulator,Aire)是主要表达于胸腺髓质上皮细胞,调节组织特异性抗原、参与T细胞阴性选择的转录调节因子。Aire基因突变将导致APECED病,其临床表现为多器官和腺体的自身免疫病和慢性皮肤粘膜念珠... 详细信息

研究背景:自身免疫调节因子(Autoimmune regulator,Aire)是主要表达于胸腺髓质上皮细胞,调节组织特异性抗原、参与T细胞阴性选择的转录调节因子。Aire基因突变将导致APECED病,其临床表现为多器官和腺体的自身免疫病和慢性皮肤粘膜念珠菌感染。近年发现在外周淋巴组织及血源性的DC、单核/巨噬细胞和粒细胞中也有Aire的表达,但其作用尚不清楚。DC细胞在通过分泌相应细胞因子调控CD4T细胞亚群的分化中发挥重要作用。因此,本研究拟探讨表达Aire的DC细胞对CD4T细胞亚群的影响及机制。目的:通过研究转染Aire的DC2.4细胞对CD4T细胞亚群的影响及其机制,探讨Aire在外周DC中表达的作用及机制。方法:1.建立稳定转染Aire的DC2.4细胞(A1-1)和空载组细胞(C1-1-1)。2.观察过表达Aire的DC细胞对CD4T细胞亚群的影响。利用Transwell小室,将C1-1-1、A1-1细胞分别与C57BL/6J小鼠脾脏CD4T细胞共培养,分别采用RT-qPCR和FACS检测各CD4T亚群特征性转录因子和细胞因子的表达。3.研究过表达Aire的DC细胞对CD4T细胞亚群的影响机制。采用RT-qPCR和ELISA检测C1-1-1、A1-1细胞中与CD4T细胞亚群变化的相关细胞因子表达,并在共培养体系中加入有变化细胞因子的抗体拮抗后,观察对CD4T细胞亚群的影响。结果:1.表达Aire的DC细胞对CD4T细胞亚群的影响。A1-1组相对于C1-1-1组的CD4T细胞T-bet、RORγT mRNA表达明显升高(p≤0.01),表达IFN-γ、IL-17的细胞亚群比例明显升高(p≤0.05),而其它转录因子(GATA-3、IRF-4及PU.1、AHR和Foxp3)和特征分子(IL-4、IL-9、IL-22和Foxp3)的表达无变化。2.表达Aire的DC细胞对CD4T细胞亚群的影响机制。A1-1细胞TGF-β、IL-6、IL-12p40的mRNA和蛋白表达明显高于C1-1-1细胞,共培养体系中分别或联合加入anti-TGF-β、anti-IL-6后Th17型细胞明显减少,加入antiIL-12p40后Th1型细胞明显减少。结论:Aire可通过促进DC细胞中IL-12及TGF-β、IL-6的表达,诱导Th1及Th17细胞亚群的分化和形成。

关键词： Aire DC2.4 细胞因子 T细胞亚群

来源： cnki会议评论

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哈尔滨工业大学学报 2024年第6期56卷 1-7页

作者：张杰杨杰李冬水质科学与水环境恢复工程北京市重点实验室(北京工业大学) 北京100124 城市水资源与水环境国家重点实验室(哈尔滨工业大学) 哈尔滨150090

为培养亚硝酸盐型反硝化聚磷菌实现好氧颗粒污泥(AGS)短程硝化内源反硝化除磷,设置3组同规格以厌氧/好氧/缺氧后置短时曝气(AO_(1)A-O_(2))模式运行的SBR,各反应器好氧段/后置好氧段(O_(1)/O_(2))的曝气强度和曝气时间均不同,通过对比3... 详细信息

为培养亚硝酸盐型反硝化聚磷菌实现好氧颗粒污泥(AGS)短程硝化内源反硝化除磷,设置3组同规格以厌氧/好氧/缺氧后置短时曝气(AO_(1)A-O_(2))模式运行的SBR,各反应器好氧段/后置好氧段(O_(1)/O_(2))的曝气强度和曝气时间均不同,通过对比3组反应器60 d的运行情况,探究各系统污染物处理性能和功能菌活性。结果表明,后置短时低氧曝气10 min且O_(1)、O_(2)的曝气强度分别为5、2.5 L/(h·L)的R2脱氮除磷效果最佳,其COD、TP、NH^(+)_(4)-N、TN去除率达95.49%、95.57%、100%、95.52%。通过短时好氧饥饿和低溶解氧可以创造出短程硝化内源反硝化除磷的最适环境,R2中约60%的除磷菌为DPAOs,且亚硝酸盐型聚磷菌最多,可达38.76%,其反应器好氧段的亚硝酸盐积累率(R_(NA))为74.19%,实现了较高的NO^(-)_(2)-N积累,游离亚硝酸(FNA)为1.03μg/L,可抑制PAOs和NOB,同时富集出更多的AOB和DPAOs。

关键词：短程硝化好氧颗粒污泥反硝化除磷短时曝气

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移植过表达Aire的骨髓DCs对1型糖尿病的预防作用

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移植过表达Aire的骨髓DCs对1型糖尿病的预防作用

交替饥饿下PN1/PN2系统抑制NOB研究

第十二届全国免疫学学术大会

作者：赵博李冬贝罗亚东赵兵杰邹雪阳李一吉林大学基础医学院

研究背景:胸腺髓质上皮细胞(mTECs)和树突状细胞(DCs)通过阴性选择,即异位表达组织限制性抗原(TRAs),清除自身反应性T细胞或诱导产生调节性T细胞(Tregs)维持中枢免疫耐受,防止自身免疫病。自身免疫调节因子(Aire)是迄今被发现调控TRAs... 详细信息

研究背景:胸腺髓质上皮细胞(mTECs)和树突状细胞(DCs)通过阴性选择,即异位表达组织限制性抗原(TRAs),清除自身反应性T细胞或诱导产生调节性T细胞(Tregs)维持中枢免疫耐受,防止自身免疫病。自身免疫调节因子(Aire)是迄今被发现调控TRAs表达最确切的分子。Aire基因缺失或突变将导致APECED病,临床表现为自身免疫性多腺体综合征:如1型糖尿病(T1D)等。研究证实Aire主要表达在mTEC和DCs,DCs作为专职抗原提呈细胞,在免疫应答和免疫耐受均扮演重要角色。近年来,研究证明了DCs防治自身免疫病的可行性。因此,通过遗传操纵DCs中Aire,发挥调控多种TRAs效应,可作为有效清除自身反应性T细胞、诱导免疫耐受更科学、合理的策略。目的:采用基因转导和骨髓细胞移植两种技术结合,将Aire转导至BMDCs,体外观察Aire对BMDCs耐受状态影响,体内观察Aire-BMDCs对NOD鼠T1D的影响并探讨其机制,为自身免疫病防治提供新策略。方法:1.采用FACS检测GFP/Aire-BMDCs中共刺激分子和MHC-Ⅱ的表达;2.采用RT-qPCR检测GFP/Aire-BMDCs中多种TRAs的表达;3.经尾静脉移植GFP-BMDCs/Aire-BMDCs/Ins-siRNA-BMDCs至4周龄NOD鼠,并设生理盐水(NS)对照组,每两周注射一次,连续五次。第6周起每两周检测小鼠血糖和胰腺炎症浸润情况,每四周检测血清胰岛素自身抗体(IAA)含量;4.采用FACS方法每四周检测小鼠脾细胞CD4T细胞亚群变化及自身反应性T细胞凋亡情况。结果:***-BMDCs中CD40、CD86和MHC-Ⅱ表达明显低于GFP组;***-BMDCs中多种TRAs表达上调;3.移植Aire-BMDCs组NOD鼠胰腺炎症浸润程度、血糖和IAA含量较对照组低,16周龄时,NS、GFP和InssiRNA组小鼠均发生T1D,而Aire组未发病;4.16周龄时,Aire组脾细胞Th1、Th17、Tfh数量低于对照组,Th2和Tregs产生增多。10周龄时,Aire组CD4T细胞凋亡率较其他组高,12、16周龄时,Aire组凋亡率持续增高,其余组升高不明显。结论:Aire可维持BMDCs的未成熟状态,具有诱导免疫耐受的作用,从而预防NOD鼠T1D的发生。

关键词： Aire DC 免疫耐受 T1D

来源： cnki会议评论

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中国环境科学 2024年第1期44卷 202-210页

作者：李冬任纪元张杰北京工业大学城市建设学部水质科学与水环境恢复工程北京市重点实验室北京100124 哈尔滨工业大学环境学院城市水资源与水环境国家重点实验室黑龙江哈尔滨150090

为了抑制亚硝酸盐氧化菌(NOB)的生长繁殖,采用序批式反应器(SBR)运行PN1/PN2系统,设置4组反应器R1~R4,分别设置连续运行段和交替饥饿/恢复运行段.饥饿期溶解氧(DO)浓度分别设置为(1±0.5),(2±0.5),(3±0.5),(4±0.5)mg/L,探讨交替周期... 详细信息

为了抑制亚硝酸盐氧化菌(NOB)的生长繁殖,采用序批式反应器(SBR)运行PN1/PN2系统,设置4组反应器R1~R4,分别设置连续运行段和交替饥饿/恢复运行段.饥饿期溶解氧(DO)浓度分别设置为(1±0.5),(2±0.5),(3±0.5),(4±0.5)mg/L,探讨交替周期的选取、饥饿期DO条件对功能菌活性、污泥浓度、粒径及胞外聚合物(EPS)的影响,以期实现部分硝化段的稳定运行.结果显示,相比于好氧氨氧化菌(AOB),NOB在面对饥饿时表现得更为敏感,活性衰减速率更高,恢复期前3d AOB的活性恢复速率高于NOB,因此3d的交替周期能够有效抑制NOB并保留AOB活性.采用交替周期为3d的交替饥饿/恢复策略进行70d的运行,4组反应器的亚硝酸盐氮积累率(NAR)分别达到73.36%、84.43%、91.21%、95.97%,运行过程中出现了污泥减量化的现象,但经过一段时间的适应后R1~R3的污泥浓度能够保持稳定,而R4则呈下降趋势;交替饥饿/恢复策略使系统逐渐排除沉降性能较差的絮体,而沉降性能好的污泥留在反应器内,第70d 4个反应器的污泥粒径分别达到190.69,197.56,207.69,153.56µm;环境变化刺激微生物分泌更多EPS,因此4组反应器污泥的EPS含量都呈现不同幅度的升高.实验结果表明交替饥饿/恢复策略可以刺激污泥产生有利的变化,实现有效的NOB抑制以及稳定的NO_(2)^(-)-N积累.

关键词：短程硝化饥饿好氧氨氧化菌亚硝酸盐氧化菌活性抑制厌氧氨氧化

过表达Aire的DC细胞诱导外周CD4+T细胞耐受的研究

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过表达Aire的DC细胞诱导外周CD4+T细胞耐受的研究

顶/底部变频交替延时进水模式的厌氧氨氧化系统特性

第十届全国免疫学学术大会

作者：李冬贝李海军牛坤伟郭彦彤郭川李一杨巍吉林大学基础医学院免疫学系

目的 :在外周免疫系统,自身免疫调节因子Aire可表达在血源性树突状细胞(DCs)中,DC可通过诱导自身反应性CD4+T细胞克隆无能或克隆清除来维持T细胞耐受,而Aire是否参与这一过程尚不清楚,因此我们研究过表达Aire的DC对CD4+T细胞耐受功能的... 详细信息

目的 :在外周免疫系统,自身免疫调节因子Aire可表达在血源性树突状细胞(DCs)中,DC可通过诱导自身反应性CD4+T细胞克隆无能或克隆清除来维持T细胞耐受,而Aire是否参与这一过程尚不清楚,因此我们研究过表达Aire的DC对CD4+T细胞耐受功能的影响。方法 :1、RT-q PCR、流式检测Aire对DC中耐受相关分子的影响;2、RT-q PCR、Annxin-V和7-ADD染色检测过表达Aire的DC(Aire-DC)对T细胞耐受性分子及CD4+T细胞凋亡的影响;3、流式检测Aire-DC对CD4+T细胞TCR信号通路的影响;4、流式检测Aire-DC诱导的CD4+T细胞对小鼠T1D发生的影响。结果 :1、Aire上调DC中1型糖尿病(T1D)相关自身抗原GAD65/67、Ins2、IA-2和IGRP的表达;Aire下调经LPS刺激的DC的表面分子CD40、CD80、CD83、CD86、CD11c的表达。2、Aire-DC上调STZ-T1D鼠T细胞耐受性分子CD73、Lag3、FR4的表达和WT鼠中Lag3、FR4的表达;Aire-DC促进STZ-T1D鼠脾细胞中CD4+T细胞的凋亡。3、Aire-DC下调经Insulin刺激的两种鼠来源脾细胞中CD4+IFN-γ+T细胞数量及CD4+T细胞中TCR信号通路分子Ca2+和p-ERK的表达。4、将与Aire-DC混合培养的WT小鼠脾细胞,经尾静脉回输小鼠,然后腹腔注射STZ诱导T1D,发现小鼠血糖浓度明显降低,且小鼠脾细胞的CD4+T细胞中IFN-γ、Ca2+和p-ERK的表达减少。结论 :表达Aire的DC通过诱导自身反应性T细胞凋亡,同时抑制TCR信号通路,使其功能性失活,诱导自身反应性T细胞耐受,从而预防T1D的发生。

关键词：自身免疫调节因子树突状细胞 CD4+T细胞 1型糖尿病

来源： cnki会议评论

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中国环境科学 2024年

作者：李冬陶博张杰北京工业大学水质科学与水环境恢复工程北京市重点实验室哈尔滨工业大学城市水资源与水环境国家重点实验室

厌氧氨氧化污泥颗粒化过程较慢且易受水力剪切力和基质浓度波动的影响.同时，颗粒污泥的传质性能随着粒径的增长逐渐恶化，进而导致系统脱氮性能受限.本文提出一种顶/底部变频交替延时进水运行模式，通过延长进水时间，并增设回流提供... 详细信息

厌氧氨氧化污泥颗粒化过程较慢且易受水力剪切力和基质浓度波动的影响.同时，颗粒污泥的传质性能随着粒径的增长逐渐恶化，进而导致系统脱氮性能受限.本文提出一种顶/底部变频交替延时进水运行模式，通过延长进水时间，并增设回流提供充足水力剪切力，改变顶/底部交替进水位置及频次，有效降低了基质浓度对厌氧氨氧化菌的冲击负荷，强化了系统脱氮性能.探究了系统运行期间污泥浓度、颗粒性能、EPS分泌和脱氮稳定性等变化情况.结果表明，该进水模式下总氮去除率达84.80%，颗粒平均粒径为783.67 μm， EPS含量为169.13 mg/gVSS.增加进水负荷后，游离氨最高浓度为9.70 mg/L，未对系统造成抑制作用.显微镜结果显示，该进水模式下系统内颗粒颜色较深，血红素c含量较高，AnAOB活性较佳.高通量测序结果表明，顶/底部变频交替延时进水模式能够大幅提高系统内厌氧氨氧化菌属Candidatus＿Brocadia的丰度，当交替频次为3次时达43.59%的最高占比.该进水方式加快了污泥与底物的混合，缩短了颗粒化进程，同时提升了污泥活性和抗冲击负荷能力，实现了厌氧氨氧化系统的稳定运行.

关键词：顶底部变频交替延时进水游离氨回流系统饥饿时长

考虑箍筋与CFRP布相互作用的CFRP布加固RC梁受剪承载力细观研究

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建筑结构学报 2024年第3期45卷 208-219页

作者：金浏张江兴李冬杜修力北京工业大学城市减灾与防灾防护教育部重点实验室北京100124

为揭示CFRP布加固RC梁剪切破坏机理,采用同时考虑混凝土材料细观非均质性、钢筋与混凝土相互作用、CFRP布与混凝土相互作用的数值模拟方法,建立CFRP布加固RC梁三维细观数值分析模型。分析了箍筋、CFRP布及其相互作用对梁剪切破坏的影响... 详细信息

为揭示CFRP布加固RC梁剪切破坏机理,采用同时考虑混凝土材料细观非均质性、钢筋与混凝土相互作用、CFRP布与混凝土相互作用的数值模拟方法,建立CFRP布加固RC梁三维细观数值分析模型。分析了箍筋、CFRP布及其相互作用对梁剪切破坏的影响,建立了CFRP布加固RC梁截面名义抗剪强度修正计算式。研究表明:梁受剪承载力随配箍率(0%、0.2%、0.5%、0.8%)和配纤率(0%、0.066 8%、0.133 6%、0.267 2%)增大均有不同程度提高,但提高幅度随配箍率和配纤率增加而减小;箍筋应变和CFRP布应变均与主斜裂缝位置紧密相关,越靠近主斜裂缝位置的应变越大,且峰值应变随配箍率和配纤率增加而减小,当配纤率由0.066 8%增至0.267 2%时,CFRP布应变降低了45.9%,当配箍率由0.2%增至0.8%时,CFRP布应变减小了30.6%;箍筋和CFRP布之间存在不利相互作用,其对梁的剪切贡献不能简单叠加;建立的考虑配箍率、配纤率及其相互作用影响的CFRP布加固RC梁截面名义抗剪强度修正计算式计算值与试验值的误差小于20%,较为准确合理,可用于预测CFRP布加固RC梁的受剪承载力。

关键词：钢筋混凝土梁配箍率 CFRP配纤率细观分析剪切性能