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固有淋巴样细胞在口腔鳞状细胞癌微环境中的作用探讨

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中华口腔医学杂志 2024年第4期59卷 394-399页

作者：刘丽萍查月王瑾瑜徐恋祎秦旭华中科技大学同济医学院口腔医学院武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院口腔医学中心、华中科技大学同济医学院口腔医学院、口腔颌面发育与再生湖北省重点实验室武汉430030

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是口腔癌的主要类型,其发病率高,侵袭能力强,易转移,疗效不佳,预后较差,给患者的口颌正常功能、外形、人际交往和心理状态造成巨大负面影响。固有淋巴样细胞(ILC)是驻扎在黏膜屏障中的重要免疫细胞组分,在肿瘤发生... 详细信息

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是口腔癌的主要类型,其发病率高,侵袭能力强,易转移,疗效不佳,预后较差,给患者的口颌正常功能、外形、人际交往和心理状态造成巨大负面影响。固有淋巴样细胞(ILC)是驻扎在黏膜屏障中的重要免疫细胞组分,在肿瘤发生、发展、转归等进程中均发挥重要作用,是解码肿瘤微环境调控机制、全景式绘制肿瘤进展的关键细胞。本文简要综述ILC的研究进展,归纳ILC在OSCC免疫微环境中可能的特性及作用,挖掘ILC和OSCC发生、发展的关联,为OSCC免疫治疗提供新的思路。

关键词：癌,鳞状细胞固有淋巴样细胞肿瘤微环境杀伤细胞,天然肿瘤发生肿瘤进展

靶向EGFRvⅢ的CAR-NK细胞对胶质瘤细胞杀伤作用的体外实验研究

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中华神经外科杂志 2024年第8期40卷 841-847页

作者：陈举林依日扎提·艾力秦虎吉文玉郑伊桐汪永新新疆医科大学第一附属医院神经外科乌鲁木齐830000 神经肿瘤精准诊断与临床转化重点实验室乌鲁木齐830000

目的探索靶向表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的嵌合抗原受体(CAR)修饰的人外周血来源自然杀伤(NK)细胞在脑胶质瘤细胞中的杀伤作用。方法通过Ficoll密度梯度离心法获得人外周血来源的NK细胞并进行体外扩增培养,并通过慢病毒感染... 详细信息

目的探索靶向表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的嵌合抗原受体(CAR)修饰的人外周血来源自然杀伤(NK)细胞在脑胶质瘤细胞中的杀伤作用。方法通过Ficoll密度梯度离心法获得人外周血来源的NK细胞并进行体外扩增培养,并通过慢病毒感染构建靶向EGFRvⅢ的CAR-NK细胞及U87-EGFRvⅢ稳转细胞株。根据不同效应细胞作用于不同靶细胞而将实验组分为NK+U87组、NK+U87-EGFRvⅢ组、CAR-NK+U87组、CAR-NK+U87-EGFRvⅢ组,通过实时无标记细胞分析(RTCA)及乳酸脱氢酶(LDH)释放实验评价CAR-NK细胞对胶质瘤细胞的杀伤作用,同时使用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B(GzmB)以及穿孔蛋白1(PRF1)在细胞培养上清中的分泌情况。结果流式细胞分析显示分离、培养得到的人外周血来源NK细胞的纯度为97.6%,存活率为98.2%;成功构建第二代靶向EGFRvⅢ的CAR分子,并成功构建靶向EGFRvⅢ的CAR-NK细胞,流式分析显示阳性细胞率为69.6%。RTCA结果显示靶细胞的生长曲线随时间呈上升趋势,过表达EGFRvⅢ的U87细胞增殖速率要高于U87细胞;在加入效应细胞后,细胞指数呈现下降趋势,在相同效靶比(E∶T)下,CAR-NK+U87-EGFRvⅢ组的细胞指数下降趋势快于NK+U87-EGFRvⅢ组,且快于CAR-NK+U87组。LDH释放实验进一步证明随着效靶比的增加,靶细胞的裂解率逐渐升高(F_(NK+U87)=700.61、F_(CAR-NK+U87)=2063.97、F_(NK+U87)-EGFRvⅢ=5707.00、F_(CAR-NK+U87)-EGFRvⅢ=28858.57,均P细胞裂解率均低于CAR-NK+U87-EGFRvⅢ组(均P0.05);CAR-NK+U87-EGFRvⅢ组分别与NK+U87-EGFRvⅢ组、CAR-NK+U87组相比,TNF-α、IFN-γ、GzmB、PRF1的分泌量均增高(均P细胞对EGFRvⅢ表达阳性的胶质瘤细胞具有较强的杀伤作用,其抗肿瘤能力优于NK细胞。

关键词：神经胶质瘤受体,表皮生长因子杀伤细胞,天然体外研究

冬虫夏草对天然杀伤细胞活性及肺瘤克隆形成的影响

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湖南医学院学报 1988年第2期 107-111页

作者：徐仁和彭祥鄂湖南医学院药理研究室湖南医学院药理研究室研究生导师

本文采用125I释放法检测小鼠和人的体外天然杀伤细胞（NK）活性,用125I清除法检测小鼠体内NK活性,同时以Lewis 肺癌细胞对小鼠进行肺瘤克隆形成试验,研究了冬虫夏草醇提液（CS-Ⅱ）对小鼠和人NK活性及小鼠肺瘤克隆形成的影响。实验表明,... 详细信息

本文采用125I释放法检测小鼠和人的体外天然杀伤细胞（NK）活性,用125I清除法检测小鼠体内NK活性,同时以Lewis 肺癌细胞对小鼠进行肺瘤克隆形成试验,研究了冬虫夏草醇提液（CS-Ⅱ）对小鼠和人NK活性及小鼠肺瘤克隆形成的影响。实验表明,CS-Ⅱ对小鼠和人的NK活性具有增强作用,并能保护免疫抑制小鼠NK活性的降低,抑制小鼠肺瘤克隆的形成。

关键词：冬虫夏草草药杀伤细胞,天然肺肿瘤克隆细胞人类小鼠

自然杀伤细胞肠病2例临床病理学特征分析及文献复习

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中华病理学杂志 2022年第2期51卷 108-113页

作者：霍雅君张丹丹周琳李晨飞王冠男赵武干张延平简翔宇黄会粉李文才郑州大学第一附属医院病理科郑州450052 郑州大学第一附属医院消化内科郑州450052

目的探讨自然杀伤(natural killer,NK)细胞肠病的临床病理学特征及预后,加深对该罕见疾病的了解和认知,避免误诊。方法收集2017年10月至2021年2月郑州大学第一附属医院诊治的NK细胞肠病2例。分析其临床特点、形态学、免疫组织化学、EB... 详细信息

目的探讨自然杀伤(natural killer,NK)细胞肠病的临床病理学特征及预后,加深对该罕见疾病的了解和认知,避免误诊。方法收集2017年10月至2021年2月郑州大学第一附属医院诊治的NK细胞肠病2例。分析其临床特点、形态学、免疫组织化学、EB病毒编码的RNA(EBER)原位杂交及T细胞受体(TCR)基因重排情况,电话随访患者。结果2例患者均为男性,年龄分别为40岁及28岁,患者均因体检入院,无明显胃肠道症状,内镜示例1胃体部可见黏膜微隆起及少量充血、糜烂,例2直肠黏膜可见充血糜烂。显微镜下观察2例病灶均较局限,表现为黏膜固有层内较多淋巴样细胞浸润,例2可见浸润至黏膜肌层,例1病变区黏膜内腺体减少,腺腔略受挤压变形,2例均未见浸润或破坏腺体现象;淋巴样细胞具有不典型性,胞体中等-偏大,胞质中等-略丰富,嗜酸性或透亮,例2少数细胞胞质内可见特征性的嗜酸性颗粒;2例核均圆形、卵圆形及不规则形,染色质细腻,核仁不明显,未见明确核分裂象;例1可见少量坏死;2例均未见血管中心性生长及破坏现象。免疫表型:不典型淋巴样细胞表达CD56、颗粒酶B及T细胞胞质内抗原1,2例CD3均可见部分细胞胞质阳性,例2 CD4可见部分细胞弱阳性,CD5、CD8、CD30、间变性淋巴瘤激酶及B细胞标志物(CD20、CD79α)均阴性,Ki-67阳性指数约60%及30%。2例EBER原位杂交均阴性,TCR基因重排均呈多克隆性重排。随访:2例患者均未经特殊治疗,生存良好。结论NK细胞肠病罕见,生物学行为类似于良性肿瘤,偶可复发;组织学及免疫表型易与NK/T细胞来源的淋巴瘤混淆,结合内镜特点、EBER原位杂交阴性、TCR基因多克隆性重排及良好的预后,可以明确诊断,避免误诊导致过度治疗。

关键词：胃肠疾病杀伤细胞,天然淋巴组织增殖性疾病免疫组织化学

CD20或CD79α异常表达的成熟T/NK细胞淋巴瘤临床病理学特征

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中华病理学杂志 2022年第5期51卷 413-418页

作者：李杜娟康红张雷徐紫光王小燕王力夫宋晓霞孔令非河南省人民医院郑州大学人民医院河南大学人民医院病理科郑州450003

目的:探讨CD20或CD79α异常表达的成熟T/NK细胞淋巴瘤临床病理学特征及预后。方法:回顾性分析河南省人民医院2014年1月至2020年12月诊断的641例成熟T/NK细胞淋巴瘤,筛选14例CD20阳性和1例CD79α阳性的成熟T/NK细胞淋巴瘤,收集临床资料,... 详细信息

目的:探讨CD20或CD79α异常表达的成熟T/NK细胞淋巴瘤临床病理学特征及预后。方法:回顾性分析河南省人民医院2014年1月至2020年12月诊断的641例成熟T/NK细胞淋巴瘤,筛选14例CD20阳性和1例CD79α阳性的成熟T/NK细胞淋巴瘤,收集临床资料,采用HE、免疫组织化学染色和EB病毒编码的RNA(EBER)原位杂交及免疫球蛋白(Ig)、T细胞受体(TCR)基因重排检测,并分析临床病理特征。结果:男性13例,女性2例,中位年龄56岁。8例非特指外周T细胞淋巴瘤(PTCL-NOS)、3例结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)、2例单形性嗜上皮性肠道T细胞淋巴瘤(MEITL)及2例血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)。12例属于Ⅲ/Ⅳ期,预后差。组织学形态、免疫表型及TCR基因重排与相对应的淋巴瘤类型无明显差异。Ki-67阳性指数均>70%。CD20或CD79α表达弱且具有异质性。15例Ig基因重排均呈多克隆。结论:CD20或CD79α异常表达的成熟T/NK细胞淋巴瘤少见,分期晚,预后差。CD20或CD79α表达弱,增殖指数高。其诊断应结合组织学观察、多种抗体联用及基因重排等多种检测。

关键词：淋巴瘤,T细胞杀伤细胞,天然抗原,CD20 抗原,CD79 基因重排

肝脏驻留自然杀伤细胞在肝细胞癌发生发展中的作用

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临床肝胆病杂志 2022年第2期38卷 457-460页

作者：王俊旗徐锋中国医科大学附属盛京医院普通外科沈阳110004

肝脏驻留自然杀伤(LrNK)细胞作为新近发现的组织驻留性自然杀伤细胞,具有较强的免疫杀伤功能。在肝细胞癌(HCC)的发生发展过程中,LrNK细胞功能受损,且可能通过上调相关免疫检查点的表达促进HCC进展。基于最新的相关研究,综述了LrNK细胞... 详细信息

肝脏驻留自然杀伤(LrNK)细胞作为新近发现的组织驻留性自然杀伤细胞,具有较强的免疫杀伤功能。在肝细胞癌(HCC)的发生发展过程中,LrNK细胞功能受损,且可能通过上调相关免疫检查点的表达促进HCC进展。基于最新的相关研究,综述了LrNK细胞的免疫功能及其在HCC发生发展过程中的作用,以期探究该细胞在HCC免疫治疗中的应用前景。

关键词：癌,肝细胞杀伤细胞,天然免疫疗法

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诱导性多能干细胞来源的抗MSLN-iCAR-NK细胞对卵巢上皮性癌细胞的杀伤作用

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中华妇产科杂志 2023年第12期58卷 922-929页

作者：樊茹佳张云凤王轶英王悦 Wenxin Zheng 河南省人民医院郑州大学人民医院河南大学人民医院妇产科郑州450003 Department of Pathology University of Texas Southwestern Medical CenterDallasTX 75019USA

目的探讨诱导性多能干细胞(iPS)来源的抗间皮素(MSLN)-嵌合抗原受体自然杀伤(CAR-NK)细胞(即抗MSLN-iCAR-NK细胞)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的杀伤作用。方法收集2020年9月至2021年9月就诊于河南省人民医院行手术治疗的20例卵巢癌患者... 详细信息

目的探讨诱导性多能干细胞(iPS)来源的抗间皮素(MSLN)-嵌合抗原受体自然杀伤(CAR-NK)细胞(即抗MSLN-iCAR-NK细胞)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的杀伤作用。方法收集2020年9月至2021年9月就诊于河南省人民医院行手术治疗的20例卵巢癌患者的癌组织,并收集20例同期因其他良性疾病行手术切除的正常卵巢组织。(1)采用免疫组化和免疫荧光法检测卵巢癌组织中MSLN蛋白的表达。(2)对新鲜卵巢癌组织进行原代卵巢癌细胞的提取和培养。构建抗MSLN-CAR-CD244重组慢病毒载体,并与iPS混匀进行扩增培养,获得抗MSLN-iCAR细胞,使用细胞因子诱导分化法分化为抗MSLN-iCAR-NK细胞。细胞实验分为3组,抗MSLN-iCAR-NK细胞组、自然杀伤(NK)细胞组和对照组。(3)采用流式细胞仪、活细胞染色实验检测3组卵巢癌细胞的凋亡情况。(4)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测3组卵巢癌细胞中γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、颗粒酶B(GZMB)、穿孔素1(PRF1)、白细胞介素(IL)6、IL-10的表达水平。结果(1)免疫组化法检测显示,卵巢癌组织中MSLN蛋白的阳性表达率为65%(13/20),正常卵巢组织为30%(6/20),两者比较,差异有统计学意义(χ^(2)=4.912,P=0.027)。免疫荧光法检测显示,卵巢癌组织中MSLN蛋白的阳性表达率为70%(14/20),正常卵巢组织为30%(6/20),两者比较,差异有统计学意义(χ^(2)=6.400,P=0.011)。(2)流式细胞仪检测显示,抗MSLN-iCAR-NK细胞组卵巢癌细胞的凋亡率为(29.27±0.85)%,NK细胞组、对照组分别为(8.44±0.34)%、(6.83±0.26)%,3组间两两比较,差异均有统计学意义(P均细胞染色实验结果显示,抗MSLN-iCAR-NK细胞组卵巢癌细胞的死亡细胞数/活细胞数为(36.3±8.3)%,NK细胞组和对照组分别为(5.4±1.4)%、(2.0±1.3)%,3组间两两比较,差异均有统计学意义(P均细胞组卵巢癌细胞中IFN-γ、TNF-α、GZMB、PRF1、IL-6、IL-10的表达水平均显著高于NK细胞组和对照组(P均细胞对卵巢癌细胞具有较强的杀伤能力,有望成为卵巢癌细胞免疫治疗的新方法。

关键词：卵巢肿瘤免疫疗法间皮素抗原,肿瘤嵌合抗原受体杀伤细胞,天然诱导多能干细胞

程序性死亡受体1及其配体在急性髓系白血病患者中的表达及其体外对程序性死亡受体1阳性自然杀伤细胞抗肿瘤作用的影响

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白血病．淋巴瘤 2023年第7期32卷 385-393页

作者：程诚李冬贝米瑞华陈琳曹长松魏旭东郑州大学附属肿瘤医院血液科郑州450008

目的探讨程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)通路在急性髓系白血病(AML)患者中的表达及其与临床特征、预后的关系,并体外验证其对PD-1阳性自然杀伤(NK)细胞抗AML细胞的影响。方法前瞻性收集2019年7月至2020年12月于郑州... 详细信息

目的探讨程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)通路在急性髓系白血病(AML)患者中的表达及其与临床特征、预后的关系,并体外验证其对PD-1阳性自然杀伤(NK)细胞抗AML细胞的影响。方法前瞻性收集2019年7月至2020年12月于郑州大学附属肿瘤医院确诊的65例AML患者骨髓标本及32例AML患者外周血,同时留取24名健康人外周血作为健康对照。流式细胞术检测骨髓肿瘤细胞PD-L1、外周血NK细胞PD-1表达水平,分析骨髓肿瘤细胞PD-L1与NK细胞PD-1表达与患者临床病理特征及疗效、预后的关系。流式细胞术检测AML细胞株THP-1(靶细胞)的PD-L1、NK细胞株NKL(效应细胞)的PD-1表达水平。经及未经PD-L1抑制剂梣酮(25 μmol/L)处理的THP-1细胞分别为实验组和对照组,分别与NKL细胞按不同效靶比共培养。流式细胞术检测THP-1细胞凋亡情况和NKL细胞NKG2D的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况并计算增殖抑制率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养体系上清中干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果 AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于健康对照组[38.5%(25/65)比8.3%(2/24),P=0.029],AML患者外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例高于健康对照组[40.6%(13/32)比12.5%(3/24),P=0.035]。骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性和阴性患者间及外周血NK细胞PD-1阳性和阴性患者间性别、年龄、就诊时血象、原始细胞比例、危险度分层、染色体核型、有无基因突变(除外NPM1基因)、融合基因及法、美、英协作组(FAB)分型的构成差异均无统计学意义(均P>0.05)。复发难治患者中骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于初治患者[58.8%(10/17)比31.2%(15/48),P=0.045],复发难治患者与初治患者间外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例的差异无统计学意义[38.5%(5/13)比42.1%(8/19),P=0.837]。PD-L1阳性与阴性患者完全缓解(CR)率差异无统计学意义[69.6%(16/23)比74.3%(26/35),P>0.05];PD-1阳性与阴性患者CR率差异无统计学意义[66.7%(8/12)比70.6%(12/17),P>0.05]。PD-L1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[12.5%(2/16)比19.2%(5/26),P>0.05];PD-1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[25.0%(2/8)比16.7%(2/12),P>0.05]。流式细胞术检测示,NKL细胞PD-1阳性率为(67±6)%,THP-1细胞PD-L1阳性率为(85±5)%。与NKL细胞共培养后,与对照组相比,实验组THP-1细胞凋亡率和增殖抑制率均明显增高,NKL细胞表面NKG2D表达升高,共培养上清中IFN-γ、TNF-α水平升高。结论 AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平较高,外周血NK细胞PD-1表达水平亦较高,复发难治AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平高于初治患者。体外抑制THP-1细胞PD-L1表达可增强NKL细胞肿瘤杀伤活性,其机制可能是抑制THP-1细胞PD-L1表达后上调了NKL细胞活化型受体NKG2D的表达以及促进了IFN-γ和TNF-α的分泌。

关键词：白血病,髓样,急性杀伤细胞,天然程序性死亡受体1 程序性死亡受体配体1 细胞因子类 NKG2D

细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞水平在STEMI患者预后评估中的价值

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中国基层医药 2023年第2期30卷 210-213页

作者：李金秀夏天陈保增聊城市第二人民医院山东第一医科大学附属聊城二院重症医学科聊城252600 聊城市第二人民医院山东第一医科大学附属聊城二院药学部聊城252600 聊城市第二人民医院山东第一医科大学附属聊城二院心内科聊城252600

目的:分析细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞水平在ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者预后评估中的价值。方法:选取聊城市第二人民医院2020年9月至2021年8月收治的经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的STEMI患者158例,检测患者入院即刻和术后48 h的细胞毒... 详细信息

目的:分析细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞水平在ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者预后评估中的价值。方法:选取聊城市第二人民医院2020年9月至2021年8月收治的经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的STEMI患者158例,检测患者入院即刻和术后48 h的细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞比例;于治疗后随访1个月,依据心血管不良事件发生情况,分为心血管不良事件发生组与未发生组,分析与STEMI患者临床预后相关的影响因素及相关性。结果:158例STEMI患者中有27例发生心血管不良事件(17.09%)。与未发生组相比,发生组收缩压、左室射血分数(LVEF)、低密度脂蛋白水平差异均有统计学意义(t=2.82、4.27、2.32,均P细胞毒性T淋巴细胞[(22.75±8.39)%、(29.23±4.61)%]、NK细胞[(13.73±4.64)%、(20.64±4.52)%]水平均明显低于术前(t=-5.05、-83.68、-142.71、-7084.80,均P细胞毒性T淋巴细胞[(27.47±3.35)%、(22.75±8.39)%]和NK细胞[(21.42±4.36)%、(13.73±4.64)%]水平均明显低于未发生组(t=7.68、13.10、4.16、5.76,均P细胞毒性T淋巴细胞细胞细胞毒性T淋巴细胞细胞细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞水平降低提示不良预后风险增加。

关键词： ST段抬高型心肌梗死经皮冠状动脉介入治疗 T淋巴细胞,细胞毒性杀伤细胞,天然预后心血管不良事件回归分析