乌药挥发油通过AMPK/mTOR信号通路诱导胃癌AGS细胞凋亡和自噬

作     者：梁霄 李娅兰 张筠昊 白皓天 肖展 孙鑫 文武龙 杨婧 王锐 LIANG Xiao;LI Yalan;ZHANG Junhao;BAI Haotian;XIAO Zhan;SUN Xin;WEN Wulong;YANG Jing;WANG Rui

作者机构：黑龙江中医药大学药学院哈尔滨150040 黑龙江中医药大学基础医学院哈尔滨150040 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2023年第29卷第15期

页      面：42-50页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100501[医学-中医基础理论] 100502[医学-中医临床基础] 100601[医学-中西医结合基础] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然科学基金项目(82074271,81603418) 黑龙江中医药大学“优秀创新人才支持计划”科研项目(2020YQ05) 

主　　题：乌药 挥发油 信号通路 自噬 细胞凋亡 

摘      要：目的:研究乌药挥发油对人胃癌细胞AGS凋亡和自噬的的影响,并探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在其中的调控作用。方法:利用水蒸气蒸馏法提取乌药挥发油,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测乌药挥发油对人胃癌细胞AGS细胞活力的影响,并根据半抑制浓度(IC_(50))确定最佳给药浓度与时间,用于后续研究;设置空白组、乌药挥发油低、中、高质量浓度组(0、15、30、60 mg·L^(-1))及阳性药环磷酰胺(CTX)组(350 mg·L^(-1))。用不同浓度的乌药挥发油处理AGS细胞48 h,采用细胞集落形成实验检测细胞增殖能力的变化、流式细胞仪检测细胞周期的变化、细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化、苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态的变化、Annexin-V/碘化丙啶(PI)双染法检测AGS细胞凋亡率、吖啶橙(AO)染色观察自噬水平的变化、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬效应蛋白Beclin-1、p62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、剪切的多聚ADP-核糖聚合酶(cleaved PARP)、单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、雷帕霉素机械靶蛋白(mTOR)及磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达水平的变化。结果:与空白组比较,AGS细胞经乌药挥发油干预24、48 h,细胞活性被明显抑制(P0.05,P0.01),呈浓度和时间依赖性;乌药挥发油各浓度组细胞增殖与迁移能力明显降低(P0.05,P0.01),且随浓度的上升抑制能力越明显;乌药挥发油将AGS细胞周期阻滞于G_(2)/M期(P0.05,P0.01),呈浓度依赖性;乌药挥发油各浓度组出现细胞圆化,体积变小并伴随凋亡小体形成等现象,细胞凋亡率明显增加(P0.05,P0.01);随着乌药挥发油浓度的增加,自噬体数量增加致红色荧光逐渐增强,提示自噬水平的提升;乌药挥发油各浓度组Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、Bax/Bcl-2及AMPK蛋白表达水平明显升高(P0.05,P0.01);p62与p-mTOR蛋白表达水平明显降低(P0.05,P0.01)。结论:乌药挥发油通过调节AMPK/mTOR信号通路诱导AGS细胞凋亡和自噬介导的生长抑制。