布鲁氏菌外膜蛋白16单克隆抗体的制备及初步应用

作     者：翟云逸 袁野 李俊玫 田路路 刁梓洋 李彬 陈家露 周栋 靳亚平 王爱华 ZHAI Yunyi;YUAN Ye;LI Junmei;TIAN Lulu;DIAO Ziyang;LI Bin;CHEN Jialu;ZHOU Dong;JIN Yaping;WANG Aihua

作者机构：西北农林科技大学动物医学院农业农村部动物生物技术重点实验室杨凌712100 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2023年第54卷第5期

页      面：2083-2091页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：“十三五”国家重点研发计划项目(2018YFD0500904) 

主　　题：布鲁氏菌 外膜蛋白16 原核表达 单克隆抗体 竞争ELISA 

摘      要：旨在制备布鲁氏菌外膜蛋白16(OMP16)单克隆抗体,建立OMP16抗体竞争ELISA方法,为布病临床防控提供免疫血清学检测手段。本研究选取保守性高、免疫原性良好的布鲁氏菌OMP16,经原核表达获得携带GST或His标签的重组OMP16(rOMP16)。利用杂交瘤技术筛选可稳定分泌OMP16特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经亚型鉴定、细胞核型分析和抗体交叉反应性试验分析单抗性质。制备小鼠腹水并纯化,方阵滴定法建立布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法。结果表明,成功构建OMP16原核表达系统,经表达、纯化获得rGST-uOMP16和rHis-OMP16。筛选到1株遗传稳定的OMP16特异性杂交瘤细胞株,命名为B7;经鉴定,该抗体亚型为IgM-κ型,可识别目的蛋白,与标签蛋白无交叉反应。建立了布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法,该方法与试管凝集试验检测结果相比总体符合率为90.53%,显示出良好的一致性。本研究有望为布鲁氏菌病的临床防控提供特异性高、敏感性好的免疫血清学检测方法。