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ycjX和ycjF基因在布鲁氏菌热应激中的作用

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微生物学通报 2022年第12期49卷 5159-5170页

作者：陈家露支飞杰李胜男王萍萍李彬刁梓洋靳亚平王爱华西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 农业农村部动物生物技术重点实验室陕西杨凌712100

【背景】细菌应对环境压力的能力对其存活和增殖及引起感染具有重要意义。充分揭示布鲁氏菌应激机制,可为防控布鲁氏菌病提供理论依据。研究发现,ycjX基因在细菌热应激时高表达且可能受σ^(32)调节,ycjF基因在细菌败血症期间表达显著上... 详细信息

【背景】细菌应对环境压力的能力对其存活和增殖及引起感染具有重要意义。充分揭示布鲁氏菌应激机制,可为防控布鲁氏菌病提供理论依据。研究发现,ycjX基因在细菌热应激时高表达且可能受σ^(32)调节,ycjF基因在细菌败血症期间表达显著上升,二者在革兰阴性菌中可能构成操纵子。【目的】研究ycjX和ycjF基因在布鲁氏菌热应激中的作用。【方法】对布鲁氏菌(Brucella)及其ycjX和ycjF双基因缺失株(ΔycjXF)和回补株(CΔycjXF)进行热应激试验,计算3株菌的存活率。利用RT-PCR和β-半乳糖苷酶活性检测试验鉴定ycjX和ycjF的操纵子模式和启动子区域活性。利用ChIP试验分析σ^(32)与ycjX和ycjF的靶向调节关系。表达并纯化pGEX-4T-1-σ^(32)重组蛋白,凝胶电泳迁移试验分析σ^(32)与ycjX和ycjF之间的结合关系。【结果】热刺激后ΔycjXF存活显著低于Brucella suis S2和CΔycjXF。明确布鲁氏菌ycjX和ycjF为同一转录本,确定其启动子区域具有活性。ChIP试验表明,σ^(32)可靶向富集在ycjXF启动子区,凝胶电泳迁移试验确定σ^(32)可与ycjXF体外直接结合。【结论】在σ^(32)的调节下,ycjX和ycjF在布鲁氏菌热应激中发挥正向作用。

关键词：布鲁氏菌 ycjX ycjF 双基因缺失株 σ^(32)因子热应激

基于“肾主骨生髓”理论对滋肾益髓汤治疗CKD3-4期肾性贫血伴SHPT的临床观察

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基于“肾主骨生髓”理论对滋肾益髓汤治疗CKD3-4期肾性贫血伴SHPT...

作者：刁泽洋黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

布鲁氏菌外膜蛋白16单克隆抗体的制备及初步应用

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畜牧兽医学报 2023年第5期54卷 2083-2091页

作者：翟云逸袁野李俊玫田路路刁梓洋李彬陈家露周栋靳亚平王爱华西北农林科技大学动物医学院农业农村部动物生物技术重点实验室杨凌712100

旨在制备布鲁氏菌外膜蛋白16(OMP16)单克隆抗体,建立OMP16抗体竞争ELISA方法,为布病临床防控提供免疫血清学检测手段。本研究选取保守性高、免疫原性良好的布鲁氏菌OMP16,经原核表达获得携带GST或His标签的重组OMP16(rOMP16)。利用杂交... 详细信息

旨在制备布鲁氏菌外膜蛋白16(OMP16)单克隆抗体,建立OMP16抗体竞争ELISA方法,为布病临床防控提供免疫血清学检测手段。本研究选取保守性高、免疫原性良好的布鲁氏菌OMP16,经原核表达获得携带GST或His标签的重组OMP16(rOMP16)。利用杂交瘤技术筛选可稳定分泌OMP16特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经亚型鉴定、细胞核型分析和抗体交叉反应性试验分析单抗性质。制备小鼠腹水并纯化,方阵滴定法建立布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法。结果表明,成功构建OMP16原核表达系统,经表达、纯化获得rGST-uOMP16和rHis-OMP16。筛选到1株遗传稳定的OMP16特异性杂交瘤细胞株,命名为B7;经鉴定,该抗体亚型为IgM-κ型,可识别目的蛋白,与标签蛋白无交叉反应。建立了布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法,该方法与试管凝集试验检测结果相比总体符合率为90.53%,显示出良好的一致性。本研究有望为布鲁氏菌病的临床防控提供特异性高、敏感性好的免疫血清学检测方法。

关键词：布鲁氏菌外膜蛋白16 原核表达单克隆抗体竞争ELISA

高速铁路不同轨下基础无砟轨道不平顺谱的构建及对比分析

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中南大学学报（自然科学版） 2024年第7期55卷 2840-2855页

作者：刁洪宝欧燕强支洋赵钢杨飞中国铁道科学研究院北京100081 中国铁路南宁局集团有限公司桂林高铁基础设施段广西桂林541000 中国国家铁路集团有限公司工电部北京100844 中国国家铁路集团有限公司铁路基础设施检测中心北京100081 中国铁道科学研究院集团有限公司基础设施检测研究所北京100081

为将高速铁路轨道谱细化以应用到不同工况动力学分析中,基于10条设计速度为350 km/h的典型高速线路轨道不平顺动态检测数据及谱构建算法,对高速线路不同轨下基础无砟轨道谱进行构建分析。首先,对动态检测数据进行预处理,并对不同窗函数... 详细信息

为将高速铁路轨道谱细化以应用到不同工况动力学分析中,基于10条设计速度为350 km/h的典型高速线路轨道不平顺动态检测数据及谱构建算法,对高速线路不同轨下基础无砟轨道谱进行构建分析。首先,对动态检测数据进行预处理,并对不同窗函数、参数模型估计阶数及谱估计算法进行对比分析,选用新矩形窗的改进周期图法计算各类轨道谱,分析谱概率分布特征,提出谱峰自动识别剔除算法并对比不同阶数多项式拟合模型以对随机谱线进行表征,构建CRTSⅠ型、Ⅱ型、Ⅲ型板式及双块式高速铁路路基、桥梁、隧道地段轨道谱,并对各类型不同波段无砟轨道几何状态进行对比分析。研究结果表明:路基、桥梁地段Ⅲ型板线路轨道不平顺状态最优,其次为Ⅱ型板线路、Ⅰ型板线路,双块式随机不平顺状态最差;隧道地段Ⅱ型板线路轨道不平顺状态比双块式的好。

关键词：高速铁路轨道不平顺功率谱密度无砟轨道谱估计方法

单核细胞背包递送工程化MCF-7外泌体用于防治早期1型糖尿病

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单核细胞背包递送工程化MCF-7外泌体用于防治早期1型糖尿病

作者：张梓洋河北大学

学位级别：硕士

1型糖尿病(Type 1 diabetes mellitus,T1DM)是一种慢性自身免疫性疾病,其发病机制是T细胞破坏胰岛的β细胞,导致内源性胰岛素分泌绝对不足。虽然T1DM可以通过胰岛素替代疗法较好的控制病情,但是其治标不治本,并且需要终身反复注射给药,... 详细信息

1型糖尿病(Type 1 diabetes mellitus,T1DM)是一种慢性自身免疫性疾病,其发病机制是T细胞破坏胰岛的β细胞,导致内源性胰岛素分泌绝对不足。虽然T1DM可以通过胰岛素替代疗法较好的控制病情,但是其治标不治本,并且需要终身反复注射给药,患者依从性较差。长期以来人们一直在寻找能够抑制或逆转β细胞破坏的治疗方法,从而延缓T1DM的病程,甚至治愈T1DM。T1DM作为自身免疫性疾病,免疫疗法自然成为研究者重点关注的领域,其中,针对T细胞的免疫疗法成为研究的热点,然而现有的T细胞疗法在治疗T1DM方面面临着全身免疫抑制、长期治疗疗效不突出等难题。因此,寻找一种新的靶向T细胞、减轻全身副作用的T1DM治疗方法至关重要。肿瘤来源外泌体(Exosomes,Exo)表面携带程序性细胞死亡配体1(Programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)免疫抑制蛋白,可与细胞毒性T细胞上的程序性死亡受体-1(Programmed death 1,PD-1)结合,从而抑制T细胞的功能,引起免疫抑制效应,对于T1DM而言,可以减轻T细胞对胰岛β细胞的攻击,治疗T1DM。另外,单核细胞是炎症过程中的关键效应细胞,它具有靶向到炎症部位的特性,组织损伤发炎后,单核细胞被单核细胞趋化因子迅速动员并募集到发炎组织。基于此,本研究通过交联剂在MCF-7肿瘤细胞Exo上修饰靶向单核细胞的IgG,为了消除肿瘤Exo的致瘤性,本论文通过电穿孔的方法去除Exo内容物,得到最终的体系rExo-IgG。rExo-IgG可以靶向单核细胞,利用单核细胞能够到达炎症部位的特性,单核细胞作为背包将rExo-IgG递送至胰腺和伤口处,rExo-IgG上的PD-L1通过与T细胞表面的PD-1结合,降低T细胞活性,阻断了T细胞对β细胞的攻击,从而达到治疗早期TIDM的效果,此外,在伤口部位,rExo-IgG还能够通过极化巨噬细胞为M2型,发挥抗炎作用,从而促进伤口愈合。本论文的研究内容和结果如下:***-IgG的合成与表征我们首先通过交联剂在Exo上修饰靶向单核细胞的IgG,然后通过电穿孔去除Exo的内容物,得到最终材料rExo-IgG,通过NTA、DLS、Zeta电位、Western Blot(WB)实验对rExo-IgG进行表征,验证了rExo-IgG的成功合成。然后通过Nano Drop和BCA蛋白定量实验测定了电穿孔前后总RNA和总蛋白含量的变化。接下来通过WB实验分析了rExo-IgG标志蛋白的含量。最后通过ELISA试剂盒对rExo-IgG上PD-L1的含量进行测定,表明电穿孔对外泌体上PD-L1的含量无明显影响。2.单核细胞背包递送工程化MCF-7外泌体防治1型糖尿病的体外研究首先研究了rExo-IgG对单核细胞的靶向能力,以及是否对单核细胞的迁移和分化造成影响,结果表明rExo-IgG能够成功的靶向单核细胞并且不影响单核细胞的迁移和分化的功能,为接下来的实验奠定了基础。通过细胞流式、CCK-8、ELISA实验验证了rExo-IgG对T细胞的免疫抑制作用,并且CCK-8和WB实验表明了rExo-IgG能够抗β细胞凋亡。最后通过激光共聚焦成像、细胞流式和ELISA实验研究了rExo-IgG对巨噬细胞的极化作用,结果表明rExo-IgG可以将巨噬细胞极化为M2表型,促进抗炎细胞因子的释放,同时能够促进NIH 3T3细胞的增殖和迁移。3.单核细胞背包递送工程化MCF-7外泌体防治1型糖尿病的体内研究最后,本文以NOD/Shi Lt J小鼠为模型进行了进一步的实验。通过记录不同治疗组小鼠的血糖值以及发病率,表明了rExo-IgG能够控制小鼠血糖的升高,降低T1DM的发病率。NOD小鼠胰腺组织的细胞流式分析和免疫荧光染色结果显示,rExo-IgG降低了T细胞在胰腺组织的浸润,发挥了免疫抑制作用,同时促进β细胞的增殖并且抑制其凋亡。NOD小鼠伤口组织的H&E、Masson、免疫荧光以及血清的ELISA结果表明rExoIgG能够极化巨噬细胞到M2表型、释放抗炎因子,产生有效的抗炎效果,促进伤口愈合。综上所述,rExo-IgG可通过PD-L1/PD-1轴,显著抑制T细胞活性,发挥良好的抗凋亡作用,保护胰岛β细胞,治疗早期T1DM,同时能够有效调节巨噬细胞向抗炎M2型极化,促进伤口愈合。这些结果为rExo-IgG治疗早期T1DM,促进伤口愈合提供了基础性研究数据,具有一定的意义。

关键词：单核细胞背包外泌体 1型糖尿病伤口愈合

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突发公共卫生事件网络舆情反转预测研究

突发公共卫生事件网络舆情反转预测研究

作者：卜梓洋吉林大学

学位级别：硕士

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单传感逆变器相电流重构及故障诊断策略研究

单传感逆变器相电流重构及故障诊断策略研究

作者：马梓洋郑州轻工业大学

学位级别：硕士

电压源型逆变器广泛应用于交流电机驱动、电力系统并网等工业领域。随着逆变系统的复杂性增加,对于相电流质量检测、功率开关管故障诊断、装置成本和体积的要求更加严格。因此,在能够检测电流质量和故障诊断的前提下,减小装置成本和体积... 详细信息

电压源型逆变器广泛应用于交流电机驱动、电力系统并网等工业领域。随着逆变系统的复杂性增加,对于相电流质量检测、功率开关管故障诊断、装置成本和体积的要求更加严格。因此,在能够检测电流质量和故障诊断的前提下,减小装置成本和体积,并满足可靠性和稳定性要求对逆变系统至关重要。本文开展了基于单电流传感器的三相两电平电压源型逆变器直流母线电流采样、相电流重构和功率开关管故障诊断研究。(1)通过分析空间矢量脉冲宽度调制(Space Vector Pulse Width Modulation,SVPWM)方法,定义了不可观测区域与最小采样时间。为消除不可观测区域的影响,提出了反向互补空间矢量脉宽调制(Reverse Complementary Space Vector Pulse Width Modulation,RCSVPWM)方法,以反向互补电压矢量代替零电压矢量,为直流母线电流采样延长了采样窗口时间,通过在前后扇区内生成不同的采样脉冲,实现了三相电流的准确采样和电流重构。仿真和实验验证了所提基于RCSVPWM的相电流重构策略的有效性,且重构误差绝对值小于0.45A,重构电流总谐波失真为SVPWM方法下的28%。(2)针对单电流传感逆变器进行功率开关管故障诊断的可行性和诊断时间问题,提出了基于RCSVPWM的故障诊断策略。首先,分析了各类开路故障下电流流向以及故障电压矢量的合成机理,对重构的故障三相电流进行Park变换得到电流矢量的相角特征。其次,以电流周期进行了电流矢量的平均,得到了平均电流矢量的模值及相角特征,通过电流矢量相角、平均电流矢量模值及相角三种特征为诊断判据实现了单电流传感器开路故障诊断。实验结果验证了故障诊断策略的可行性,且诊断时间为0.5ms,可实现功率开关管的快速故障诊断。(3)为实现单电流传感逆变器相电流重构,并以较低成本进行电网电流质量的检测,提出了基于模型预测控制的相电流重构策略,通过分析模型预测电流控制机理,建立了逆变器矢量控制数学模型,定义了虚拟合成矢量并引出多矢量控制策略,区分了单矢量和多矢量控制下采样窗口的不同位置,分析了模型预测控制下的不可观测区域。提出了基于单矢量和虚拟合成矢量作用的单电流传感器模型预测电流重构策略。仿真结果验证了该策略的有效性,不同工况下总谐波失真小于5%,重构误差绝对值小于0.6A。

关键词：脉冲宽度调制单传感器电流重构功率开关管故障诊断模型预测控制

Kalina循环热力、经济和环境性能分析综述

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中国电机工程学报 2024年

作者：王楠王江峰程梓洋张君仪西安交通大学能源与动力工程学院

Kalina循环作为一种新型动力循环，变温蒸发，特性优良，可有效减小循环不可逆损失，在中低温余热资源的回收利用和低品位热源的转换方面具有显著优势。该文概括四种构型Kalina循环系统热力学第一定律性能、热力学第二定律性能、经济性... 详细信息

Kalina循环作为一种新型动力循环，变温蒸发，特性优良，可有效减小循环不可逆损失，在中低温余热资源的回收利用和低品位热源的转换方面具有显著优势。该文概括四种构型Kalina循环系统热力学第一定律性能、热力学第二定律性能、经济性能、环境性能(4E)分析研究现状，总结了循环净功和热效率、?效率、发电成本等评价指标随氨水质量分数、透平进口温度和压力、热源温度等关键参数的变化情况及原因分析。介绍了循环生命周期评价等环境性研究结果，列出目前Kalina循环发电系统的工程案例，最后对Kalina循环未来的发展方向做出展望，可为Kalina循环的性能分析及相关研究提供参考，有助于推进Kalina循环领域的技术进步和应用扩展。

关键词： Kalina循环热力学分析 ?效率环境性分析 4E分析

国际投资条约中企业社会责任条款所涉义务的可仲裁性研究

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国际经济法学刊 2024年第3期 140-156页

作者：刁梓恒外交学院国际法系

明确企业社会责任条款作为投资仲裁的考虑因素，有助于在裁判中明确企业的与有过错，同时利于防止东道国假借人权问题对投资者实施歧视性措施。企业社会责任条款的义务群由东道国义务群与投资者义务群组成，东道国国内的监管法规与企业... 详细信息

明确企业社会责任条款作为投资仲裁的考虑因素，有助于在裁判中明确企业的与有过错，同时利于防止东道国假借人权问题对投资者实施歧视性措施。企业社会责任条款的义务群由东道国义务群与投资者义务群组成，东道国国内的监管法规与企业社会责任条款相对应，国内监管法规可以提高监管水平，使得人权、环境、劳工等企业社会责任落实。投资者应当根据东道国承认的企业社会责任标准落实生产经营规范。企业落实以国内法形式载明的企业社会责任标准构成履行条约义务。至此，国家投资措施与企业社会责任条款的链接成功构建。仲裁庭所选择的平衡性分析检索范式可以分成两个阶段，第一阶段通过裁量余地规则筛选与实体问题相关的企业社会责任主张。第二阶段选择契合投资者待遇的平衡性测试。这一平衡性分析检索范式应当尊重东道国的价值优位选择，也应当排除基于贸易保护主义的限制措施。最后对于仲裁庭而言，选择任何平衡性分析检索范式都不应当构成司法造法。

关键词：企业社会责任投资仲裁平衡性分析可仲裁性