大口黑鲈amh基因全长cDNA克隆、表达及多克隆抗体制备

作     者：李兵部 曹哲明 陶易凡 徐钢春 许爱国 李鸣霄 张红英 陈诗扬 强俊 徐跑 LI Bing-Bu;CAO Zhe-Ming;TAO Yi-Fan;XU Gang-Chun;XU Ai-Guo;LI Ming-Xiao;ZHANG Hong-Ying;CHEN Shi-Yang;QIANG Jun;XU Pao

作者机构：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业与种质资源利用重点实验室无锡214081 中国农业科学院研究生院北京100081 苏州金澄福渔业科技有限公司苏州215121 

出 版 物：《水生生物学报》 (Acta Hydrobiologica Sinica)

年 卷 期：2023年第47卷第5期

页      面：775-785页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 

基　　金：江苏省种业振兴“揭榜挂帅”项目(JBGS130) 加州鲈产业重大技术协同推广计划(2022-ZYXT-07) 苏州市科技计划项目(SNG2021009)资助 

主　　题：amh 基因克隆 组织表达 多克隆抗体 性腺发育 大口黑鲈 

摘      要：为研究大口黑鲈(Micropterus salmoides)抗缪勒氏管激素(amh)基因的表达及其在性腺发育中的潜在作用,研究利用RACE技术克隆得到了大口黑鲈amh基因,并制备Amh多克隆抗体,通过qRT-PCR、Western Blot分析Amh在大口黑鲈不同组织和不同发育阶段性腺中的表达模式,最后利用HE染色法和免疫组化观察不同发育阶段性腺的形态组织学变化及其与Amh表达的潜在关系。结果显示:大口黑鲈amh基因cDNA序列全长2050 bp,由24 bp5′非编码区、394 bp3′非编码区和1632 bp的开放阅读框组成,共编码543个氨基酸。amh基因mRNA在大口黑鲈11个组织中均有表达,其中雄鱼精巢中表达量最高,肌肉次之,雌鱼卵巢中表达量最高,肌肉次之。amh基因在雌雄鱼不同发育阶段的性腺中表达存在显著差异,精巢中表达量均显著高于卵巢(P0.05)。同时,Western Blot结果显示Amh蛋白在精巢中表达丰度较高。amh基因在精巢中的表达量呈先上升后下降的趋势,且在孵化后65d鱼精巢中其表达量达到最高(P0.05),免疫组化结果显示Amh表达于早期精巢的支持细胞;孵化后135d和215d雄鱼精巢中其表达量明显下降,HE染色显示雄鱼精巢处于精子细胞生成和精子形变期,Amh主要表达于支持细胞中,精子占据精巢的绝大部分空间,支持细胞所占面积比例减少。amh基因在孵化后45d、65d和135d雌鱼卵巢中表达量较低,孵化后215d表达量上升,并且在卵母细胞的细胞膜边缘及外周的滤泡细胞和颗粒细胞检测到了Amh阳性信号。研究结果表明:在精巢中,Amh可能参与早期精巢发育;在卵巢中,其可能参与颗粒细胞和滤泡细胞发育。综上所述,Amh在大口黑鲈性腺发育中发挥着关键的调控作用。