乳兔心脏成纤维细胞的原代培养及鉴定

作     者：顾建军 朱业 张维 顾翔 GU Jianjun;ZHU Ye;ZHANG Wei;GU Xiang

作者机构：扬州大学临床医学院附属苏北人民医院心内科江苏扬州225001 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2023年第39卷第3期

页      面：571-576页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.81800250) 中国博士后科学基金资助项目(No.2022M711417)。 

主　　题：乳兔 原代培养 心脏成纤维细胞 细胞鉴定 

摘      要：目的:探讨并建立乳兔心脏成纤维细胞原代培养方法。方法:选取新出生1 d的新西兰白兔,采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化心脏组织,差速贴壁法分离和纯化心脏成纤维细胞;使用倒置显微镜观察细胞形态及生长情况,绘制细胞生长曲线;采用CCK-8法检测细胞活力;波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞纯度;Western blot法检测异丙肾上腺素刺激心脏成纤维细胞后Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平。结果:差速贴壁90 min后在相差显微镜下可见部分成纤维细胞已贴壁生长;3 d后成纤维细胞数量较前增多,形态多样,多为不规则的多边形及扁平形;5 d时成纤维细胞数量显著增多(P0.05),细胞形态趋于多样性,细胞间完全融合;细胞生长曲线类似“S形。波形蛋白阳性率可达95%。CCK-8实验结果显示在4~5 d细胞活力最强(P0.05);给予第2代心脏成纤维细胞异丙肾上腺素刺激48 h后,Col I及α-SMA水平显著增加(P0.05)。结论:本研究建立了乳兔心脏成纤维细胞原代培养方法。