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一种经济的乳兔骨髓来源的肥大细胞诱导培养及鉴定

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昆明医科大学学报 2023年第6期44卷 1-5页

作者：王禹雪张华莉陈理军陆永萍云南大学附属医院超声科云南昆明650021

目的通过一种操作简单的体外诱导培养体系获得更加成熟、更具有典型特征的肥大细胞。方法将乳兔的骨髓吹出放入含DMEM高糖培养基中,隔天换液,待细胞铺满,改用F12诱导培养基,隔天换液,镜下观察有细胞变圆时,更换为1640促成熟培养基,隔7 ... 详细信息

目的通过一种操作简单的体外诱导培养体系获得更加成熟、更具有典型特征的肥大细胞。方法将乳兔的骨髓吹出放入含DMEM高糖培养基中,隔天换液,待细胞铺满,改用F12诱导培养基,隔天换液,镜下观察有细胞变圆时,更换为1640促成熟培养基,隔7 d换液,直至细胞诱导成熟。利用甲苯胺蓝染色检测其功能,流式细胞仪检测表面CD117及FcεR1α表达结果。结果6周后甲苯胺蓝染色可观察到:加入β-巯基乙醇的可得到含较多异染颗粒的细胞。采用流式细胞术进行检测:加入β-巯基乙醇时:CD117+、FcεRIα+双阳性细胞的比例为96.2%,与不加β-巯基乙醇相比有统计学意义(P兔骨髓来源的肥大细胞,为下一步对兔进行炎性损伤研究提供了依据,使后续基础及临床研究成为可能。

关键词：乳兔骨髓肥大细胞诱导

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乳兔单一左心房肌细胞原代培养及鉴定

中国老年学杂志 2015年第15期35卷 4154-4156页

作者：郑甲林郭涛张新金陶四明代华磊韩明华李建美昆明医科大学第四附属医院心内科云南昆明650021 昆明医科大学第一附属医院心内科

目的探讨分离、纯化、培养并鉴定乳兔单一左心房肌细胞的实验方法。方法取出生48 h内乳兔左心房,用0.1%胰酶加0.1%Ⅱ型胶原酶混合消化,将消化的细胞经两次差速贴壁,再加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷抑制成纤维细胞生长进行纯化。计算酶消化后... 详细信息

目的探讨分离、纯化、培养并鉴定乳兔单一左心房肌细胞的实验方法。方法取出生48 h内乳兔左心房,用0.1%胰酶加0.1%Ⅱ型胶原酶混合消化,将消化的细胞经两次差速贴壁,再加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷抑制成纤维细胞生长进行纯化。计算酶消化后细胞存活率;倒置显微镜下观察左心房肌细胞贴壁生长状况、形态学变化等;绘制细胞生长曲线;鉴定左心房肌细胞纯度。结果消化后细胞存活率平均为85.2%;在倒置显微镜下观察,证实培养的左心房肌细胞能在较长时间内保持较高的活力;2~5 d为左心房肌细胞对数生长期,5 d后进入平顶期;左心房肌细胞经鉴定纯度达95%。结论采用混合酶消化法可以获得纯度高,在一定时间内具有较高活力的单一左心房肌细胞。

关键词：乳兔心房肌细胞原代培养

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乳兔窦房结定位、取材及纯化和培养(英文)

中国组织工程研究与临床康复 2010年第50期14卷 9485-9488页

作者：王庆志周立常玉巧新乡医学院人体解剖学教研室河南省新乡市 453003

背景:分离和纯化培养的窦房结细胞是研究其超微结构及自律性的重要条件,然而,相应的培养方法尚未标准化。目的:建立乳兔窦房结进行定位、取材和纯化培养方法,观察并判断培养窦房结细胞中起搏细胞的形态特点。方法:新生24h内乳兔心脏连... 详细信息

背景:分离和纯化培养的窦房结细胞是研究其超微结构及自律性的重要条件,然而,相应的培养方法尚未标准化。目的:建立乳兔窦房结进行定位、取材和纯化培养方法,观察并判断培养窦房结细胞中起搏细胞的形态特点。方法:新生24h内乳兔心脏连续石蜡切片,苏木精-伊红染色,光镜下判断窦房结的位置并测定,计算其大小,光镜、电镜下观察纯化培养的窦房结细胞形态。结果与结论:乳兔窦房结位于上腔静脉根部前壁向下至界沟后外约0.32mm处。培养的窦房结细胞主要有3种形态细胞:梭形、蜘蛛形、多边形,其中梭形细胞最多,占(59.6±7.3)%,搏动频率最快为(145±9)次/min,肌原纤维稀少,细胞器不发达。蜘蛛形和多边形细胞则和培养的心房肌细胞培养无差异。沿上腔静脉根部前壁向下至界沟后外侧可较精确地对窦房结进行取材。培养的乳兔窦房结细胞中,细胞体积小,搏动频率快,所占比率高的梭形细胞是窦房结的起搏细胞。

关键词：细胞培养窦房结上腔静脉定位乳兔

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乳兔房室结细胞原代培养及形态特征

西安交通大学学报（医学版） 2005年第5期26卷 417-420,434页

作者：张颖牛小麟欧妍凌凤东西安交通大学第二医院心内科陕西西安710004 西安交通大学医学院人体解剖学教研室陕西西安710061

目的观察房室结细胞体外分散培养及形态学特征。方法取新生3 d乳兔房室结组织采用差速贴壁分离技术加机械破坏非心肌细胞法进行原代细胞培养,观察记录各类培养细胞的生长状况,并进行细胞化学染色。结果在培养的房室结细胞中,至少有4种... 详细信息

目的观察房室结细胞体外分散培养及形态学特征。方法取新生3 d乳兔房室结组织采用差速贴壁分离技术加机械破坏非心肌细胞法进行原代细胞培养,观察记录各类培养细胞的生长状况,并进行细胞化学染色。结果在培养的房室结细胞中,至少有4种自发性收缩细胞及少量的不规则细胞和多边形细胞。其中梭形细胞最多,圆形细胞和三角形细胞次之,多角形细胞最少;多角形细胞和圆形细胞收缩频率最高,其次为梭形细胞,三角形细胞收缩频率最低。细胞化学染色显示:三角形细胞肌原纤维最丰富,其次为梭形细胞,多角形细胞和圆形细胞肌原纤维最少。结论兔房室结由多种形态不同的细胞构成,多角形细胞和圆形细胞可能是起搏细胞,梭形细胞可能是过渡细胞,三角形细胞可能是普通心肌细胞。

关键词：房室结细胞培养形态学乳兔

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乳兔窦房结的定位及其取材和纯化培养

实用儿科临床杂志 2005年第3期20卷 260-261,i003页

作者：王庆志毛光兰余磊邱小忠原林新乡医学院解剖学教研室新乡医学院第三附属医院中医科河南新乡453003 南方医科大学解剖学教研室广州510515

目的　定位乳兔窦房结的位置并取材和纯化培养 ,观察并初步判断培养窦房结细胞中起搏细胞的光镜、电镜结构特点。方法　新生 2 4h内乳兔心脏连续石蜡切片 ,HE染色 ,光镜下判断窦房结的位置并测定、计算其大小 ;差速贴壁结合BrdU处理行... 详细信息

目的　定位乳兔窦房结的位置并取材和纯化培养 ,观察并初步判断培养窦房结细胞中起搏细胞的光镜、电镜结构特点。方法　新生 2 4h内乳兔心脏连续石蜡切片 ,HE染色 ,光镜下判断窦房结的位置并测定、计算其大小 ;差速贴壁结合BrdU处理行窦房结组织原代细胞纯化培养 ,观察培养窦房结细胞形态变化 ,搏动频率及光镜、电镜结构。结果　乳兔窦房结位于上腔静脉根部前壁向下至界沟后外约 0 .32mm处 ,呈倒置的三角形 ,大小 1 .51mm× 0 .68mm× 0 .0 7mm ;培养的窦房结细胞主要有3种形态细胞 :梭形、蜘蛛形、多边形 ,其中梭形细胞最多 (59.6 %± 7.3 % ) ,搏动频率最快 (1 4 5± 9)次 /min ,肌原纤维稀少 ,细胞器不发达 ;而心房肌细胞培养无此特征细胞。结论　培养的乳兔窦房结细胞中 ,细胞体积小 ,搏动频率快 ,所占比率高的梭形细胞是窦房结的起搏细胞。

关键词：窦房结细胞培养乳兔

左旋精氨酸对模拟缺血再灌注乳兔培养窦房结细胞损伤的保护作用(英文)

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实用儿科临床杂志 2008年第13期23卷 1048-1050页

作者：王庆志谭静马全祥高建芝郭义威郭志坤新乡医学院解剖学教研室河南新乡453003 新乡医学院第三附属医院心内科河南新乡453003 新乡医学院病理生理学教研室河南新乡453003

目的观察模拟缺血再灌注(IR)培养乳兔窦房结细胞(SANC)损伤及左旋精氨酸(L-Arg)的保护作用。方法对SANC模拟低糖缺氧培养,添加L-Arg和L-Arg加L-NAME(L-Arg抑制剂)与培养细胞共同孵育,吖啶橙(AO)标记细胞凋亡,检测细胞内过氧化物歧化酶(S... 详细信息

目的观察模拟缺血再灌注(IR)培养乳兔窦房结细胞(SANC)损伤及左旋精氨酸(L-Arg)的保护作用。方法对SANC模拟低糖缺氧培养,添加L-Arg和L-Arg加L-NAME(L-Arg抑制剂)与培养细胞共同孵育,吖啶橙(AO)标记细胞凋亡,检测细胞内过氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、总一氧化氮合酶(NOS)、氧化亚氮(NO)水平。细胞分为正常对照组、I120R120组、I120R120加L-Arg组、I120R120加L-Arg加L-NAME组4组。结果凋亡细胞体积明显缩小,核呈黄绿色,断裂为多个碎块状,由膜包裹着凸起于细胞表面呈黄绿色凋亡小体。与I120R120组凋亡率[(5.21±1.59)%]比较,I120R120加L-Arg组凋亡率[(8.70±3.10)%]显著降低(P0.05)。结论补充NO合成底物L-Arg能清除自由基,增加SOD活性,增强细胞抗氧化损伤能力,可能是阻断氧自由基所介导的细胞凋亡机制之一。

关键词：缺血-再灌注凋亡 L-精氨酸窦房结细胞培养乳兔

L-精氨酸对模拟缺血再灌注培养乳兔窦房结细胞损伤的影响

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中国临床解剖学杂志 2007年第3期25卷 317-319页

作者：王庆志廖华邱小忠余磊郭志坤新乡医学院解剖学教研室河南新乡453003 南方医科大学解剖学教研室广州510515

目的:观察模拟缺血再灌注(IR)培养乳兔窦房结细胞(SANC)损伤及左旋精氨酸(L-Arg)干预作用。方法:对SANC模拟低糖缺氧培养,添加L-Arg和L-Arg+L-NAME与培养细胞共同孵育,观察细胞形态变化。细胞分为7组:正常对照组;I120组;I120R120组;I120... 详细信息

目的:观察模拟缺血再灌注(IR)培养乳兔窦房结细胞(SANC)损伤及左旋精氨酸(L-Arg)干预作用。方法:对SANC模拟低糖缺氧培养,添加L-Arg和L-Arg+L-NAME与培养细胞共同孵育,观察细胞形态变化。细胞分为7组:正常对照组;I120组;I120R120组;I120+L-Arg组;I120R120+L-Arg组;I120+L-Arg+L-NAME组;I120R120+L-Arg+L-NAME组。结果:I120组、I120+L-Arg+L-NAME组较多细胞核浓缩,胞质嗜酸性增强为紫红色;AO荧光染色示凋亡细胞体积明显缩小,核呈黄绿色,断裂为多个碎块状,碎裂的核由膜包裹着凸起于细胞表面呈黄绿色凋亡小体,与I120组、I120R120组比较,I120+L-Arg组、I120R120+L-Arg组凋亡率明显降低(P0.05);电镜下,凋亡细胞核染色质固缩,聚集于核膜呈境界分明的块状或新月形小体,染色质凝聚于核周边;细胞核分解成大小不等的浓缩团块,游离于胞浆中。结论:①模拟缺血一定时间后可以诱导SANC凋亡,再灌注后细胞损伤加重;②NO底物L-精氨酸可减轻模拟缺血-再灌注窦房结细胞结构损伤。

关键词：缺血-再灌注 L-精氨酸窦房结细胞培养乳兔