长链非编码RNA LINC00601调控肝细胞癌奥沙利铂耐药的分子机制研究

作     者：胡可舒 刘文凤 张锋 权冰 殷欣 HU Keshu;LIU Wenfeng;ZHANG Feng;QUAN Bing;YIN Xin

作者机构：复旦大学附属中山医院肝肿瘤内科上海200032 复旦大学附属中山医院肝癌研究所上海200032 

出 版 物：《中国癌症杂志》 (China Oncology)

年 卷 期：2023年第33卷第1期

页      面：25-35页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81672331)。 

主　　题：肝细胞癌 长链非编码RNA 奥沙利铂 化疗耐药 

摘      要：背景与目的:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)仍是当今中国乃至全世界的高发肿瘤之一,大部分HCC患者确诊时处于中晚期,对化疗耐药或介入治疗抵抗是影响此类患者生存预后的重要因素,但其中涉及的具体分子机制尚未完全明确。我们的前期研究发现长链非编码RNA LINC00601在奥沙利铂耐药的HCC细胞中高表达。本研究旨在探索LINC00601调控HCC细胞对奥沙利铂化疗耐药的作用及其机制,为临床筛选适宜接受奥沙利铂化疗的HCC患者并为中晚期HCC患者的治疗提供新的靶点和理论依据。方法:利用体外长期低剂量奥沙利铂刺激人HCC细胞株MHCC-97H和Hep-3B,建立奥沙利铂耐药细胞株97H-OXR和3B-OXR。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-timefluorescencequantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测奥沙利铂耐药细胞株中LINC00601的表达情况。进一步采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验检测LINC00601基因沉默或过表达对HCC细胞奥沙利铂化疗耐药的影响。通过流式细胞术和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞凋亡情况的变化。最后采用Western blot和免疫荧光染色检测生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45α(growth arrest and DNA damage-inducible protein 45α,GADD45A)的核转位,并通过RNA pull-down实验和RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)实验验证LINC00601和GADD45A的结合。结果:与对照组细胞相比,奥沙利铂耐药细胞株中LINC00601的表达水平显著升高。奥沙利铂耐药细胞及过表达LINC00601的MHCC-97H细胞对奥沙利铂体外刺激的敏感性显著下降;相反,下调耐药细胞中LINC00601的表达后,其对于奥沙利铂体外刺激的敏感性明显提高。同时,在奥沙利铂的处理下,高表达LINC00601的HCC细胞株的凋亡水平被明显抑制,且与不同细胞株对奥沙利铂体外处理的敏感性水平相一致。此外,LINC00601的过表达使GADD45A的核转位水平降低,细胞核中GADD45A的表达下降。进一步研究发现LINC00601与GADD45A可以相互结合。结论:LINC00601可能通过调控GADD45A的核转位,进而抑制奥沙利铂处理后的细胞凋亡,导致HCC奥沙利铂耐药。